| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| ·兽疫链球菌 | 第9页 |
| ·透明质酸 | 第9-10页 |
| ·链球菌发酵生产透明质酸 | 第10-13页 |
| ·HA的合成途径 | 第10-12页 |
| ·HA发酵生产现状 | 第12-13页 |
| ·其他微生物HA生产系统 | 第13页 |
| ·兽疫链球菌基因敲除技术现状 | 第13-14页 |
| ·sacB基因的功能概述 | 第14-15页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸异构酶(HASE)概况 | 第15-17页 |
| ·HASE简介 | 第15页 |
| ·hasE基因的敲除对糖代谢的影响 | 第15页 |
| ·HASE的表达与纯化 | 第15-16页 |
| ·HASE的酶活检测方法 | 第16-17页 |
| ·本论文研究的内容、意义和技术路线 | 第17-19页 |
| ·本论文研究的内容 | 第17-18页 |
| ·本论文研究的意义 | 第18页 |
| ·本论文的技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-47页 |
| ·实验材料 | 第19-25页 |
| ·菌种及质粒 | 第19页 |
| ·工具酶、抗生素及相关试剂 | 第19-21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-25页 |
| ·试验方法 | 第25-47页 |
| ·兽疫链球菌(S.zooepidemicus ATCC39920)基因组DNA的提取 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·质粒pSET4s：：sacB的构建 | 第26-33页 |
| ·质粒pSET4s：：sacB：：hasALR的构建 | 第33-34页 |
| ·质粒pDG148：：hasA的构建 | 第34页 |
| ·质粒pSET4s：：sacB：：hasELR的构建 | 第34-35页 |
| ·表达载体pET28a(+)：：hasE的构建 | 第35-36页 |
| ·兽疫链球菌感受态的制备 | 第36页 |
| ·兽疫链球菌的电转化 | 第36-37页 |
| ·基因敲除菌株的筛选 | 第37-38页 |
| ·兽疫链球菌RNA的提取 | 第38-41页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸异构酶(HASE)的诱导表达、纯化 | 第41-43页 |
| ·蛋白定量 | 第43-44页 |
| ·HASE的酶活测定 | 第44-47页 |
| 3 结果与讨论 | 第47-69页 |
| ·兽疫链球菌无缝敲除系统的建立 | 第47-57页 |
| ·兽疫链球菌ATCC39920基因组总DNA的提取 | 第47页 |
| ·质粒pSET4s：：sacB的构建 | 第47-49页 |
| ·sacB基因的致死效果 | 第49-50页 |
| ·质粒pSET4s：：sacB：：hasALR的构建 | 第50-51页 |
| ·兽疫链球菌hasA基因的敲除 | 第51-54页 |
| ·△hasA菌株的回补 | 第54-55页 |
| ·hasA基因的敲除对于菌株的影响 | 第55-57页 |
| ·hasE基因的敲除 | 第57-61页 |
| ·敲除质粒pSET4s：：sacB：：hasELR的构建 | 第57-58页 |
| ·hasE基因的敲除 | 第58-60页 |
| ·不同碳源对AhasE菌株生长的影响 | 第60-61页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸异构酶(HASE)的酶活测定 | 第61-67页 |
| ·表达载体pET28a(+)：：hasE的构建 | 第61-63页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸异构酶(HASE)的诱导表达 | 第63-64页 |
| ·HASE的纯化 | 第64-65页 |
| ·HASE的酶活测定 | 第65-67页 |
| ·兽疫链球菌和大肠杆菌的粗酶活 | 第67-69页 |
| 4 结论 | 第69-70页 |
| 5 展望 | 第70-71页 |
| 6 参考文献 | 第71-78页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第78-79页 |
| 8 致谢 | 第79页 |
