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猪带绦虫烯醇化酶基因的克隆、原核表达及功能研究

摘要第1-5页
Abstract第5-9页
英文缩略词表第9-10页
第1章 绪论第10-18页
   ·猪带绦虫概述第10-12页
     ·猪带绦虫免疫诊断的研究进展第10-11页
     ·猪带绦虫疫苗的研究进展第11-12页
   ·烯醇化酶的研究进展第12-17页
     ·烯醇化酶概述第12-13页
     ·烯醇化酶的性质与分布第13页
     ·烯醇化酶的结构第13-14页
     ·烯醇化酶的功能第14-17页
   ·研究目的及意义第17-18页
第2章 猪带绦虫烯醇化酶基因的克隆及序列分析第18-30页
   ·材料及试剂第18-19页
     ·虫体、菌株及载体第18页
     ·主要试剂及酶第18-19页
     ·主要仪器第19页
   ·实验方法第19-24页
     ·猪带绦虫幼虫及成虫总 RNA 的提取第19-20页
     ·第一链 cDNA 的合成第20页
     ·烯醇化酶基因的扩增第20-21页
     ·重组质粒 pET-30a(+)-ENO 的构建及鉴定第21-22页
     ·烯醇化酶基因的序列分析第22页
     ·烯醇化酶基因的荧光定量 PCR第22-24页
   ·结果第24-28页
     ·猪带绦虫幼虫及成虫总 RNA 的提取第24页
     ·烯醇化酶基因的扩增第24页
     ·重组质粒 pET-30a(+)-ENO 的鉴定第24-25页
     ·烯醇化酶基因的序列分析第25-27页
     ·烯醇化酶基因的荧光定量 PCR第27-28页
   ·讨论第28-30页
第3章 猪带绦虫烯醇化酶的原核表达及与纤溶酶原作用研究第30-41页
   ·材料第30-32页
     ·血清第30页
     ·主要试剂第30-31页
     ·主要仪器第31页
     ·溶液第31-32页
   ·实验方法第32-35页
     ·烯醇化酶的原核表达第32页
     ·烯醇化酶原核表达条件的优化第32页
     ·rTsENO 的纯化第32-33页
     ·rTsENO 的 Western blotting 检测第33页
     ·rTsENO 与人血纤维溶酶原的结合特性第33页
     ·纤溶酶原激活试验第33-34页
     ·竞争性试验第34-35页
   ·结果第35-38页
     ·烯醇化酶原核表达条件的优化第35-36页
     ·烯醇化酶表达蛋白的纯化第36-37页
     ·rTsENO 的 Western blotting第37页
     ·rTsENO 与人血纤溶酶原的结合特性第37页
     ·纤溶酶原激活试验第37-38页
     ·竞争性试验第38页
   ·讨论第38-41页
第4章 猪带绦虫烯醇化酶的组织定位第41-47页
   ·材料第41-42页
     ·虫体、血清及实验动物第41页
     ·主要试剂第41页
     ·主要仪器第41页
     ·溶液第41-42页
   ·实验方法第42-44页
     ·多克隆抗体的制备第42页
     ·间接 ELISA 测定免疫血清的抗体效价第42-43页
     ·多克隆抗体的纯化第43页
     ·免疫组化第43-44页
   ·结果第44-45页
     ·ELISA 检测结果第44页
     ·rTsENO 在猪带绦虫成熟节片中的定位观察第44-45页
   ·讨论第45-47页
第5章 猪带绦虫烯醇化酶的酶活力研究第47-58页
   ·材料和试剂第47-48页
     ·主要试剂第47页
     ·主要仪器第47页
     ·溶液第47-48页
   ·实验方法第48-51页
     ·rTsENO 的制备第48页
     ·rTsENO 酶活力及影响因素的测定第48-51页
   ·数据处理第51页
     ·rTsENO 酶比活力的计算第51页
     ·数据统计和分析第51页
   ·结果第51-55页
     ·rTsENO 的酶比活力第51页
     ·rTsENO 浓度对酶活力的影响第51-52页
     ·不同底物浓度对 rTsENO 活力的影响第52页
     ·pH 值对 rTsENO 酶活力的影响第52-53页
     ·金属离子对 rTsENO 酶活力的影响第53-55页
   ·讨论第55-58页
     ·rTsENO 浓度、底物浓度及 pH 值对酶活力的影响第55-56页
     ·金属离子对酶活力的影响第56-58页
第6章 结论第58-59页
参考文献第59-66页
致谢第66-67页
作者简介第67页

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