| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言（Preface） | 第10-13页 |
| 第一部分 M1GS 核酶体外切割活性的研究 | 第13-42页 |
| 一、材料与方法 | 第13-27页 |
| 1 实验材料 | 第13页 |
| ·酶及试剂 | 第13页 |
| ·质粒和及核苷酸片段 | 第13页 |
| 2 实验方法 | 第13-27页 |
| ·GS 的设计与合成 | 第13-14页 |
| ·M1GS 核酶基因的克隆 | 第14-18页 |
| ·M1GS 核酶基因的体外转录 | 第18-20页 |
| ·~(32)P 标记的底物 RNA 的制备 | 第20-21页 |
| ·RNA marker 的制备 | 第21-22页 |
| ·M1 RNA 活性的鉴定 | 第22-26页 |
| ·M1GS 核酶体外切割活性的测定 | 第26-27页 |
| 二、结果与分析 | 第27-39页 |
| 1 靶基因的选择 | 第27页 |
| 2 GS 结合靶位的确定 | 第27页 |
| 3 靶基因二级结构的模拟 | 第27-28页 |
| 4 M1GS 核酶基因 PCR 引物的设计 | 第28页 |
| 5 M1GS 核酶基因重组质粒的鉴定 | 第28-30页 |
| 6 M1GS 核酶的体外转录 | 第30-32页 |
| 7 ~(32)P 标记的底物 RNA 的鉴定 | 第32-33页 |
| ·pGEM-HC 重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·pGEM-HC 质粒的体外转录 | 第33页 |
| 8 RNA MARKER 的制备 | 第33-34页 |
| 9 PTRNASER基因克隆的鉴定与体外转录 | 第34-36页 |
| ·PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| ·ptRNAser的体外转录 | 第35-36页 |
| 10 M1 RNA 体外切割活性的鉴定 | 第36-37页 |
| 11 人工核酶 M1GS 对底物的体外切割 | 第37-39页 |
| ·体外切割产物的理论预计 | 第37页 |
| ·六种 M1GS 对底物 RNA 的体外切割活性 | 第37-39页 |
| 三、讨论 | 第39-42页 |
| 1 关于 GS 的设计 | 第39-40页 |
| 2 RNASE P 的体外活性鉴定 | 第40页 |
| 3 RNASE P 最佳反应时间的摸索 | 第40-41页 |
| 4 胞外切割系统的建立 | 第41-42页 |
| ·筛选库中各 EGS 引导切割作用强弱的比较 | 第41页 |
| ·M1GS 对靶 RNA 定点切割的分析 | 第41-42页 |
| 第二部分 M1GS 核酶胞内活性的初步研究 | 第42-60页 |
| 一、材料及方法 | 第42-52页 |
| 1 实验材料 | 第42页 |
| ·酶及试剂 | 第42页 |
| ·质粒和细胞 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-52页 |
| ·M1GS 核酶真核表达质粒 | 第42-45页 |
| ·绿色荧光蛋白融合表达质粒（pHCV5’UTR-EGFP）的构建 | 第45-48页 |
| ·红色荧光蛋白质粒的制备 | 第48-49页 |
| ·共转染 | 第49页 |
| ·基因组的抽提与鉴定 | 第49页 |
| ·RNA 的抽提 | 第49-50页 |
| ·RT-PCR | 第50页 |
| ·荧光观察与检测 | 第50-52页 |
| 二、结果与分析 | 第52-57页 |
| 1 M1GS-PLXSN 质粒的 PCR 鉴定 | 第52页 |
| 2 PHCV5’UTR-EGFP 重组质粒的鉴定 | 第52-53页 |
| 3 转染细胞内 M1GS 核酶表达的鉴定 | 第53-54页 |
| 4 M1GS 核酶对靶基因表达的抑制作用的检测 | 第54-57页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第54-56页 |
| ·荧光扫描检测 | 第56-57页 |
| 四、讨论 | 第57-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 展望 | 第61-62页 |
| 附录（Appendix） | 第62-76页 |
| 附录一 测序图 | 第62-66页 |
| 附录二 缩略词中英文对照 | 第66-67页 |
| 附录三 基因序列 | 第67-74页 |
| 附录四 溶液配方 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 在读硕士期间发表科研论文 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |