| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第11-32页 |
| 第一章 彩色马蹄莲细菌性软腐病的概述 | 第12-24页 |
| 1 彩色马蹄莲细菌性软腐病 | 第12-15页 |
| ·病原及病害症状 | 第12-14页 |
| ·病原菌的致病过程及致病条件 | 第14页 |
| ·病原菌的致病机理 | 第14-15页 |
| 2. 致病因子 | 第15-18页 |
| ·胞外水解酶类 | 第15-16页 |
| ·运动性 | 第16-17页 |
| ·次级代谢产物 | 第17页 |
| ·对寄主活性氧的抵御 | 第17-18页 |
| 3 致病因子的分泌 | 第18-19页 |
| ·Ⅰ型分泌系统 | 第18页 |
| ·Ⅱ型分泌系统 | 第18-19页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第19页 |
| 4 致病因子的调控 | 第19-24页 |
| ·群体感应系统(QS系统) | 第20-21页 |
| ·双组份系统 | 第21页 |
| ·KdgR调节子 | 第21-24页 |
| 第二章 微生物(细菌)中的糖代谢途径 | 第24-28页 |
| 1 EMP途径(Embden-Meyeth of pathway) | 第24页 |
| 2 HMP途径(hexose monophosphate pathway) | 第24-25页 |
| 3 ED途径(Entner-Doudoroff pathway) | 第25-28页 |
| 第三章 基因敲除技术概述 | 第28-32页 |
| 1 三种高效的基因敲除策略及特征 | 第28-32页 |
| ·线性双链DNA的Red/ET重组系统 | 第28页 |
| ·环状质粒载体介导的同源单交换和双交换策略 | 第28-30页 |
| ·转座酶介导的转座重组 | 第30-32页 |
| 下篇 研究内容 | 第32-82页 |
| 第一章 胡萝卜软腐果胶杆菌中zwf基因突变体的构建和致病性分析 | 第34-46页 |
| 摘要 | 第34页 |
| 1 试验材料 | 第34-38页 |
| ·本研究所用菌株、质粒和引物 | 第34-36页 |
| ·培养基及抗生素 | 第36-38页 |
| 2 试验方法 | 第38-42页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·PCR反应体系 | 第39-40页 |
| ·DNA凝胶电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第40页 |
| ·DNA酶切、连接以及PCR产物回收 | 第40页 |
| ·大肠杆菌DH5α化学感受态细胞的制备及转化 | 第40-41页 |
| ·突变体的构建 | 第41页 |
| ·细菌致病性的测定 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-43页 |
| ·突变菌株的构建 | 第42-43页 |
| ·突变体的致病性 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 第二章 胡萝卜软腐果胶杆菌中eda基因的功能分析 | 第46-72页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1 试验材料 | 第47-48页 |
| ·本研究所用菌株、质粒和引物 | 第47-48页 |
| ·培养基及抗生素 | 第48页 |
| 2 试验方法 | 第48-60页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第48页 |
| ·质粒的提取 | 第48页 |
| ·PCR反应体系 | 第48页 |
| ·DNA凝胶电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第48-49页 |
| ·DNA的酶切、连接以及PCR产物回收 | 第49页 |
| ·大肠杆菌DH5α化学感受态细胞的制备及转化 | 第49页 |
| ·Southern杂交 | 第49-51页 |
| ·eda缺失突变体的构建及互补菌株的构建 | 第51-53页 |
| ·过表达菌株及空载体对照株的构建 | 第53-54页 |
| ·对不同碳源利用的测定 | 第54页 |
| ·细菌游动性和沉降性试验 | 第54页 |
| ·生物膜的检测 | 第54-55页 |
| ·过氧化氢耐受性测定 | 第55页 |
| ·胞外酶的检测 | 第55-56页 |
| ·生长情况的测定 | 第56-57页 |
| ·致病性测定 | 第57页 |
| ·细菌总RNA的提取及qRT-PCR检测 | 第57-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-69页 |
| ·eda上下游片段基因的克隆 | 第60页 |
| ·eda突变株的构建 | 第60-62页 |
| ·互补菌株的构建 | 第62页 |
| ·eda基因突变影响了菌株对碳源的利用 | 第62-63页 |
| ·eda基因突变不影响PccS1的运动性及沉降性 | 第63-64页 |
| ·eda基因突变基本不影响生物膜的产生 | 第64页 |
| ·eda基因突变改变了PccS1的过氧化氢耐受性 | 第64-65页 |
| ·eda基因突变降低了胞外酶的产生 | 第65-66页 |
| ·eda基因突变不影响PccS1的生长能力 | 第66-67页 |
| ·eda基因突变影响了PccS1致病性 | 第67-68页 |
| ·eda基因突变影响致病相关基因的表达 | 第68-69页 |
| 4 讨论与结论 | 第69-72页 |
| 第三章 胡萝卜软腐果胶杆菌中dcuA、cutA1和cycZ基因的功能分析 | 第72-82页 |
| 摘要 | 第72-73页 |
| 1 试验材料 | 第73-74页 |
| ·本研究所用菌株、质粒和引物 | 第73-74页 |
| ·培养基及抗生素 | 第74页 |
| 2 试验方法 | 第74-76页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第74页 |
| ·质粒的提取 | 第74页 |
| ·PCR反应体系 | 第74页 |
| ·DNA凝胶电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第74-75页 |
| ·DNA的酶切、连接以及PCR产物回收 | 第75页 |
| ·大肠杆菌DH5α化学感受态细胞的制备及转化 | 第75页 |
| ·缺失突变株的构建 | 第75页 |
| ·细菌游动性和沉降性试验 | 第75页 |
| ·生物膜的检测 | 第75页 |
| ·过氧化氢耐受性测定 | 第75-76页 |
| ·胞外酶的检测 | 第76页 |
| ·致病性测定 | 第76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-80页 |
| ·dcuA、cutA1和cycZ基因的克隆 | 第76页 |
| ·dcuA、cutA1和cycZ突变株的构建 | 第76-77页 |
| ·dcuA、cutA1和cycZ基因突变不影响PccS1的运动性及沉降性 | 第77-78页 |
| ·dcuA、cutA1和cycZ基因突变增强了生物膜形成能力 | 第78-79页 |
| ·dcuA、cutA1和cycZ基因突变增强了PccS1的过氧化氢耐受性 | 第79页 |
| ·dcuA、cutA1和cycZ基因突变不影响胞外酶的产生 | 第79-80页 |
| ·dcuA、cutA1和cycZ基因突变不影响PccS1的致病性 | 第80页 |
| 4 讨论与结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
