| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 縮略词中英文对照表 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| ·绪论 | 第11页 |
| ·VIGS诱导的基因沉默技术及应用 | 第11-15页 |
| ·VIGS技术的原理 | 第12-13页 |
| ·VIGS载体 | 第13-14页 |
| ·VIGS侵染技术 | 第14页 |
| ·VIGS技术的应用现状 | 第14-15页 |
| ·RNA-seq技术及应用 | 第15-17页 |
| ·RNA-seq的概述及原理 | 第15-16页 |
| ·RNA-seq的应用 | 第16-17页 |
| ·棉花中DPC作用机制的研究 | 第17-19页 |
| ·植物生长延缓剂 | 第17-18页 |
| ·棉花中DPC的作用机理及应用 | 第18-19页 |
| ·植物抗旱 | 第19-21页 |
| ·干旱胁迫概述 | 第19-20页 |
| ·植物抗旱机理 | 第20-21页 |
| ·棉花抗旱的研究现状及展望 | 第21页 |
| ·棉花黄萎病的研究 | 第21-24页 |
| ·棉花黄萎病的致病机理 | 第22-23页 |
| ·BAK1基因的功能 | 第23页 |
| ·棉花对黄萎病的抗性分析 | 第23-24页 |
| ·cDNA文库构建及应用 | 第24-25页 |
| ·cDNA文库概述 | 第24页 |
| ·棉花VIGS cDNA文库的应用前景 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 GhCPS、GhKS的分子克隆与功能验证 | 第26-42页 |
| ·试验材料 | 第26-29页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第26-28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| ·常用试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器与设备 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-33页 |
| ·棉花总RNA的提取及反转录 | 第29页 |
| ·克隆棉花GhCPS和GhKS基因 | 第29-30页 |
| ·GhCPS和GhKS的同源比对分析以及生物进化树的构建 | 第30页 |
| ·pTRV-GhCPS和pTRV-GhKS载体构建 | 第30页 |
| ·Ecoli MC1061感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA的提取及鉴定 | 第31页 |
| ·A.tumefaciens GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·棉花水培种植 | 第32页 |
| ·DPC和GA_3处理 | 第32页 |
| ·荧光定量PCR测定基因表达 | 第32页 |
| ·VIGS GhCPS和GhKS基因 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-40页 |
| ·GhCPS和GhKS的基因克隆 | 第33-34页 |
| ·GhCPS和GhKS的同源比对分析与生物进化树的构建 | 第34-37页 |
| ·DPC对GhCPS和GhKS基因表达量的调控 | 第37-38页 |
| ·VIGS棉花GhCPS和GhKS基因 | 第38-39页 |
| ·DPC对VIGS-GhCPS和VIGS-GhKS植株生长的影响 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 GhOST1参与调控棉花抗旱机制的研究 | 第42-71页 |
| ·试验材料 | 第42-47页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第42-45页 |
| ·溶液配制 | 第45-46页 |
| ·常用试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器与设备 | 第46-47页 |
| ·试验方法 | 第47-51页 |
| ·棉花RNA-seq样品的制备及分析 | 第47页 |
| ·基因克隆和载体构建 | 第47页 |
| ·Maxi-DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第48页 |
| ·棉花原生质体的分离及转化 | 第48-49页 |
| ·免疫共沉淀Co-IP检测ABA处理后GhOST1与GhMPK6间的相互作用 | 第49页 |
| ·Pull-Down检测MBP-GhOST1和GS-MPK6蛋白间的互作 | 第49页 |
| ·放射性同位素~(32)p检测激酶活性 | 第49-50页 |
| ·Western检测蛋白 | 第50页 |
| ·酵母双杂交 | 第50页 |
| ·GHOST1和GhMPK6在烟草中瞬时表达 | 第50-51页 |
| ·相对含水量测定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-68页 |
| ·RNA-seq分析棉花抗旱基因 | 第51-56页 |
| ·基因克隆及表达载体的构建 | 第56-58页 |
| ·GHOST1和GhWRKY30在棉花抗旱过程中的功能分析 | 第58-60页 |
| ·棉花SnRK家族的同源比对与生物进化树分析 | 第60-62页 |
| ·棉花GhMPK6与拟南芥AtMPK6的生物进化树分析 | 第62页 |
| ·VIGS验证GhMPK6在棉花抗旱、抗渗透胁迫机制中的作用 | 第62-63页 |
| ·GhOST1和GhMPK6蛋白表达与纯化 | 第63-64页 |
| ·GhMPK6与GhOST1激酶活性测定 | 第64-65页 |
| ·GhOST1和GhMPK6的互作 | 第65-66页 |
| ·GhOST1和GhMPK6在烟草中瞬时表达 | 第66-67页 |
| ·ABA激活拟南芥突变体mpk3、mpk6和ost1-1中的MPK3和MPK657 | 第67页 |
| ·ABA诱导mpk3、mpk6和snrk2.2/3/6中与ABA信号相关基因的表达 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| 第四章 GhBAK1参与介导棉花黄萎病抗性和调控细胞死亡 | 第71-85页 |
| ·试验材料 | 第71-72页 |
| ·植物材料 | 第71页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第71-72页 |
| ·溶液配制 | 第72页 |
| ·试验方法 | 第72-74页 |
| ·棉花GhBAK1基因的克隆 | 第72-73页 |
| ·棉花GhBAK1 VIGS载体的构建 | 第73页 |
| ·农杆菌介导的VIGS体系在CA4002中的建立 | 第73页 |
| ·Verticillium dahliae侵染棉花 | 第73页 |
| ·Verticillium dahliae侵染拟南芥 | 第73-74页 |
| ·利用数据库分析棉花SERK基因家族 | 第74页 |
| ·台盼蓝Trypan blue染色鉴定细胞死亡 | 第74页 |
| ·二氨基联苯胺DAB染色测定活性氧ROS产物 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-83页 |
| ·棉花CA4002中VIGS体系的建立 | 第74-75页 |
| ·GhMKK2和GhVe1参与棉花抗黄萎病信号途径 | 第75-76页 |
| ·分析棉花的SERK家族 | 第76-80页 |
| ·BAK1在植物抗黄萎病机制中具有保守功能 | 第80-82页 |
| ·GhBAK1调控细胞死亡 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 第五章 棉花VIGS cDNA文库的构建 | 第85-91页 |
| ·试验材料 | 第85-87页 |
| ·植物材料 | 第85页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第85-86页 |
| ·溶液配制 | 第86-87页 |
| ·试验方法 | 第87-88页 |
| ·RNA提取和mRNA纯化 | 第87页 |
| ·cDNA文库的合成 | 第87页 |
| ·构建cDNA文库的VIGS载体 | 第87-88页 |
| ·结果与分析 | 第88-90页 |
| ·RNA的提取和mRNA的纯化 | 第88页 |
| ·载体的构建与鉴定 | 第88-89页 |
| ·筛选文库流程图 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| 第六章 结论 | 第91-93页 |
| ·GhCPS和GhKS基因表达水平被DPC调控,可能是DPC作用的靶位点 | 第91页 |
| ·GhOST1和GhWRKY30在ABA信号途径中具有正调控作用 | 第91页 |
| ·GhMPK6在ABA依赖型信号途径中起正调控作用,且可与GhOST1互作并相互磷酸化修饰传递ABA信号 | 第91-92页 |
| ·GhBAK1在棉花抗黄萎病机制中具有正调控作用 | 第92页 |
| ·成功构建棉花VIGS cDNA文库 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105页 |
