| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-28页 |
| ·水稻条纹病毒 | 第15-17页 |
| ·水稻条纹叶枯病 | 第15-16页 |
| ·水稻条纹病毒 | 第16-17页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒 | 第17-19页 |
| ·水稻黑条矮缩病 | 第17-18页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒 | 第18-19页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性 | 第19-21页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性 | 第19-20页 |
| ·RNAi 作用机制 | 第20页 |
| ·hpRNA 与 RNAi | 第20-21页 |
| ·无选择标记转基因植物的培育 | 第21-24页 |
| ·选择标记基因的应用及安全性问题 | 第21-23页 |
| ·无选择标记转基因策略 | 第23-24页 |
| ·位点特异性重组系统 | 第23页 |
| ·转座子介导的基因重组系统 | 第23-24页 |
| ·共转化 | 第24页 |
| ·植物病毒的检测方法 | 第24-27页 |
| ·植物病毒检测方法研究进展 | 第24-25页 |
| ·血清学在植物病毒研究上的应用 | 第25-27页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-52页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·毒源 | 第28页 |
| ·供试植物、所用抗体和实验动物 | 第28页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-52页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第28-31页 |
| ·植物表达载体构建策略 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第29-30页 |
| ·目的片段和质粒 DNA 的酶切 | 第30页 |
| ·DNA 片段的回收（试剂盒法） | 第30-31页 |
| ·DNA 片段与质粒的连接 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·重组质粒向大肠杆菌转化（热激法） | 第31-32页 |
| ·转化菌落 PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·质粒 DNA 的大量提取（碱性 SDS 法） | 第32-34页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒向农杆菌转化（冻融法） | 第34-35页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化及转基因植株的获得 | 第35-36页 |
| ·预培养 | 第35页 |
| ·农杆菌侵染和共培养 | 第35页 |
| ·转化植株的获得 | 第35-36页 |
| ·转基因水稻植株总 DNA 的提取（苯酚法） | 第36页 |
| ·转基因水稻植株 PCR 检测 | 第36页 |
| ·转基因水稻植株潮霉素抗性检测 | 第36-37页 |
| ·转基因水稻植株的抗病性鉴定 | 第37页 |
| ·转基因植株的 ELISA 检测 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的 Southern blot 分析 | 第38-41页 |
| ·转基因植株总 DNA 的酶切 | 第38页 |
| ·DNA 凝胶电泳 | 第38页 |
| ·DNA 转膜 | 第38-39页 |
| ·探针标记（随机引物法） | 第39页 |
| ·DIG 标记有效性的检测 | 第39-40页 |
| ·预杂交与杂交 | 第40页 |
| ·洗膜与显影 | 第40-41页 |
| ·转基因植株总 RNA 的 Northern blot 分析 | 第41-44页 |
| ·转基因植株总 RNA 的提取（Trizol 法） | 第41页 |
| ·RNA 甲醛凝胶电泳 | 第41-42页 |
| ·RNA 转膜 | 第42页 |
| ·探针制备（探针标记） | 第42-43页 |
| ·DIG 标记有效性的检测 | 第43页 |
| ·预杂交与杂交 | 第43页 |
| ·洗膜与显影 | 第43-44页 |
| ·转基因植株 siRNA 的 Northern blot 分析 | 第44-46页 |
| ·转基因植株 siRNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·siRNA 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45页 |
| ·siRNA 转膜 | 第45页 |
| ·siRNA 探针的制备 | 第45-46页 |
| ·siRNA 杂交 | 第46页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·RBSDV CP 基因的克隆 | 第46-48页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第48页 |
| ·重组质粒在 BL21 中的诱导和表达 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE 检测目的蛋白的表达 | 第48-50页 |
| ·目的蛋白的大量表达和纯化 | 第50页 |
| ·多克隆抗血清的制备及效价测定 | 第50-51页 |
| ·Western blot 检测 | 第51页 |
| ·蛋白的提取及含量测定 | 第51页 |
| ·蛋白的电泳和转膜 | 第51页 |
| ·免疫检测 | 第51页 |
| ·ELISA 检测抗血清特异性 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-69页 |
| ·抗 RSV 无选择标记转基因水稻的培育 | 第52-60页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第52-54页 |
| ·目的片段的获得 | 第52页 |
| ·正向目的片段与表达载体的连接 | 第52-53页 |
| ·反向目的片段与重组中间载体的连接 | 第53-54页 |
| ·重组载体的酶切鉴定 | 第54页 |
| ·重组质粒向农杆菌 EHA105 转化 | 第54页 |
| ·T_0代转基因植株的获得 | 第54-55页 |
| ·T_0代转基因植株的潮霉素抗性鉴定和 PCR 检测 | 第55-57页 |
| ·T_1代转基因植株的潮霉素抗性鉴定和 PCR 检测 | 第57页 |
| ·T_2代转基因植株的 PCR 检测 | 第57页 |
| ·T_2代转基因植株的抗性鉴定 | 第57-58页 |
| ·T_2代转基因植株的 Southern 杂交分析 | 第58-59页 |
| ·T_2代转基因植株的 Northern 杂交分析和 siRNA 杂交分析 | 第59-60页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白多克隆抗体制备 | 第60-69页 |
| ·目的片段的获得 | 第60-61页 |
| ·序列分析 | 第61-63页 |
| ·测序结果 | 第61-62页 |
| ·序列分析 | 第62-63页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第63-69页 |
| ·重组载体的酶切鉴定 | 第63-64页 |
| ·RBSDV CP 基因的原核表达 | 第64-66页 |
| ·多克隆抗血清的制备及效价测定 | 第66页 |
| ·检测多克隆抗体的特异性 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| ·抗 RSV 无选择标记转基因水稻的培育 | 第69-70页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备 | 第70-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
