| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 1 绪论 | 第15-38页 |
| ·引言 | 第15-16页 |
| ·猴头菌的研究概况 | 第16-18页 |
| ·猴头菌菌种鉴定 | 第16-17页 |
| ·猴头菌的生物学研究概况 | 第17-18页 |
| ·木材腐朽菌 | 第18-23页 |
| ·木材腐朽 | 第18-20页 |
| ·Peroxidases的分类 | 第20-22页 |
| ·白腐菌降解木质素的酶系统 | 第22-23页 |
| ·锰过氧化物酶 | 第23-29页 |
| ·白腐菌锰过氧化物酶同工酶基因 | 第24-25页 |
| ·白腐菌锰过氧化物酶同工酶诱导的条件 | 第25-26页 |
| ·白腐菌锰过氧化物酶同工酶的分析技术 | 第26页 |
| ·基因启动子序列 | 第26-28页 |
| ·白腐菌锰过氧化物酶分离纯化 | 第28页 |
| ·木质素降解酶的脱色处理 | 第28-29页 |
| ·MnP基因的表达 | 第29-32页 |
| ·MnP基因的同源表达 | 第29-30页 |
| ·MnP基因的异源表达 | 第30-32页 |
| ·现代分子生物学技术 | 第32-34页 |
| ·分子生物学技术的应用 | 第32页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第32-33页 |
| ·重组DNA技术 | 第33页 |
| ·预测蛋白三维结构及软件 | 第33-34页 |
| ·研究目的和意义 | 第34-36页 |
| ·研究的主要内容 | 第36-37页 |
| ·课题来源 | 第37-38页 |
| 2 猴头菌CB1形态特征与系统发育分析 | 第38-43页 |
| ·材料与方法 | 第38-39页 |
| ·菌种来源 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·培养特性的试验与观察 | 第38页 |
| ·ITS序列扩增与系统发育分析 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·猴头菌菌株CB1的培养特性 | 第39页 |
| ·猴头菌菌株CB1的ITS序列与系统发育分析 | 第39-41页 |
| ·本章小结 | 第41-43页 |
| 3 猴头菌CB1锰过氧化物酶的检测与染料脱色的研究 | 第43-50页 |
| ·材料和方法 | 第43-44页 |
| ·菌种 | 第43页 |
| ·主要试剂和染料 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·产酶培养及酶活测定 | 第43-44页 |
| ·四种染料在固体培养基和液体培养基的脱色 | 第44页 |
| ·四种染料的标准曲线绘制 | 第44页 |
| ·染料脱色率的计算方法 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·猴头菌木质素降解酶系统及不同锰离子浓度的MnP的检测结果 | 第44-45页 |
| ·四种染料在固体培养基中的脱色 | 第45-46页 |
| ·四种染料的标准曲线绘制结果 | 第46-47页 |
| ·四种染料在液体培养基中的脱色效果 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-50页 |
| 4 猴头菌CB1锰过氧化物酶同工酶基因克隆及序列分析 | 第50-73页 |
| ·材料与方法 | 第50-53页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·试验引物 | 第51-52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| ·提取猴头菌的总RNA和DNA | 第52页 |
| ·猴头菌MnP的cDNA基因克隆 | 第52页 |
| ·猴头菌MnP的.DNA基因克隆及启动子区序列 | 第52-53页 |
| ·生物信息学分析与基因序列预测 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-71页 |
| ·猴头菌不同锰离子浓度的总DNA及MnP简并PCR的扩增 | 第53-54页 |
| ·猴头菌不同锰离子浓度的总RNA及MnP同工酶cDNA基因片段 | 第54-55页 |
| ·猴头菌He-mnp1和He-mnp2同工酶cDNA基因的3'和5'RACE结果 | 第55页 |
| ·猴头菌He-mnp1和He-mnp2同工酶基因全长cDNA的PCR扩增结果 | 第55页 |
| ·猴头菌He-mnp1和He-mnp2同工酶基因全长DNA的PCR扩增结果 | 第55-56页 |
| ·猴头菌He-mnp1和He-mnp2同工酶基因的5’和3’非翻译区的扩增结果 | 第56-57页 |
| ·猴头菌MnP的cDNA和DNA全长序列及启动子区序列分析 | 第57-61页 |
| ·猴头菌MnP同工酶基因的蛋白结构分析 | 第61-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 5 猴头菌MnP同工酶cDNA基因实时荧光定量PCR | 第73-79页 |
| ·材料与方法 | 第73-74页 |
| ·菌种 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·试验引物 | 第73-74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-75页 |
| ·猴头菌菌丝的收集及不同Mn~(2+)浓度的诱导处理 | 第74页 |
| ·猴头菌总RNA的制备及质量检测 | 第74页 |
| ·猴头菌He-mnp1、He-mnp2及内参基因He-β-tubulin的cDNA片段的扩增 | 第74-75页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第75页 |
| ·猴头菌锰过氧化物酶基因荧光定量数据分析 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-78页 |
| ·猴头菌He-mnp1、He-mnp2基因及He-β-tubulin内参基因的cDNA片段的扩增 | 第75-76页 |
| ·不同浓度的MnSO4溶液处理过程中He-mnp1和He-mnp2基因及表达 | 第76-78页 |
| ·本章小结 | 第78-79页 |
| 6 猴头菌MnP基因在构巢曲霉的异源转化与差异表达 | 第79-91页 |
| ·材料和方法 | 第79-82页 |
| ·菌株、质粒与试剂 | 第79-80页 |
| ·培养基及转化用溶液 | 第80页 |
| ·重组质粒的构建及双酶切与双酶切引物PCR验证 | 第80-81页 |
| ·原生质体制备与转化 | 第81页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第81-82页 |
| ·转化子MnP酶活测定 | 第82页 |
| ·结果与分析 | 第82-88页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第82-84页 |
| ·原生质体的制备 | 第84-85页 |
| ·转化子的筛选 | 第85-86页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第86-87页 |
| ·转化子MnP酶活测定 | 第87-88页 |
| ·本章小结 | 第88-91页 |
| 结论 | 第91-94页 |
| 参考文献 | 第94-105页 |
| 附录1 猴头菌菌株CB1的ITS序列比对结果 | 第105-106页 |
| 附录2 猴头菌He-mnp1和He-mnp2 cDNA序列同源比对 | 第106-107页 |
| 附录3 猴头菌He-mnp1和He-mnp2基因组DNA序列同源比对结果 | 第107-108页 |
| 附录4 猴头菌He-mnp1和He-mnp2的5'启动子区序列比对结果 | 第108-109页 |
| 附录5 猴头菌He-mnp1和He-mnp2的3'非翻译区序列比对结果 | 第109-110页 |
| 附录6 猴头菌荧光定量He-β-tubulin的内参基因比对结果 | 第110-111页 |
| 附录7 载体质粒pMDTM 18-T/He-mnp1和pMD~(TM) 18-T He-mnp2双酶切验证结果 | 第111-112页 |
| 附录8 重组质粒pLB01/He-mnp1和pLB01/He-mnp2的PCR扩增结果 | 第112-113页 |
| 附录9 转化子菌株TN02A7-He-mnp1和TN02A7-He-mnp2的PCR扩增结果 | 第113-114页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
