西瓜枯萎病诱导表达基因的抑制消减杂交文库构建及其EST分析
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·西瓜生产及西瓜枯萎病概述 | 第10-12页 |
| ·尖孢镰刀菌西瓜专化型 | 第10-11页 |
| ·西瓜枯萎病病症 | 第11页 |
| ·致病机理 | 第11-12页 |
| ·国内外对西瓜枯萎病的防治研究现状 | 第12-14页 |
| ·嫁接防病技术现状 | 第12-13页 |
| ·化学防治现状 | 第13页 |
| ·农业防治现状 | 第13页 |
| ·抗病育种现状 | 第13-14页 |
| ·生物防治研究现状 | 第14页 |
| ·西瓜抗枯萎病的抗性机理研究 | 第14-16页 |
| ·抑制消减杂交 | 第16-19页 |
| ·抑制差减杂交基本原理 | 第17-19页 |
| ·抑制差减杂交技术在植物抗病相关基因分离中的应用 | 第19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| ·本试验研究的主要内容 | 第20-21页 |
| 2、材料与方法 | 第21-33页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-30页 |
| ·西瓜幼苗的培育 | 第21-22页 |
| ·尖孢镰刀菌孢子悬浮液的制备 | 第22页 |
| ·接种方法 | 第22-23页 |
| ·抑制差减杂交 | 第23-27页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第28页 |
| ·插入片段的检测 | 第28-29页 |
| ·插入片段的同源性验证 | 第29-30页 |
| ·白色单克隆序列的测定 | 第30页 |
| ·过氧化物酶和水通道蛋白基因表达分析 | 第30-33页 |
| ·材料及处理 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·总RNA提取 | 第31页 |
| ·cDNA合成 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-48页 |
| ·根总RNA的抽提和mRNA的分离纯化 | 第33页 |
| ·cDNA的合成和RsaⅠ酶切 | 第33-34页 |
| ·RsaⅠ酶切效率分析 | 第34页 |
| ·两轮PCR产物的检测 | 第34-35页 |
| ·插入片段的检测 | 第35-36页 |
| ·差异表达基因的斑点杂交鉴定 | 第36页 |
| ·测序结果及分析 | 第36-46页 |
| ·转录因子相关基因 | 第42-43页 |
| ·部分逆境胁迫反应、抗性相关基因 | 第43-46页 |
| ·RT-PCR结果分析 | 第46-48页 |
| ·RNA和cDNA质量的检测 | 第46页 |
| ·过氧化物酶和水通道蛋白在接种枯萎病后的表达模式 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| ·SSH文库构建 | 第48-49页 |
| ·总RNA的质量是构建消减文库的前提 | 第48页 |
| ·接头连接效率的改进 | 第48页 |
| ·第二轮PCR产物的克隆 | 第48-49页 |
| ·文库质量评价 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 附录 | 第59页 |
