N-氨甲酰水解酶的分离纯化及固定化的初步研究
| 摘 要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·前言 | 第12-13页 |
| ·N-氨甲酰基-D-氨基酸水解酶的研究现状 | 第13-16页 |
| ·N-氨甲酰基-D-氨基酸水解酶的来源 | 第13-14页 |
| ·N-氨甲酰基-D-氨基酸水解酶的性质 | 第14-15页 |
| ·N-氨甲酰基- D-氨基酸水解酶的基础研究 | 第15-16页 |
| ·酶的分离纯化 | 第16-19页 |
| ·酶的粗分离 | 第16-18页 |
| ·细胞破碎及其碎片的分离 | 第16-17页 |
| ·酶的浓缩 | 第17-18页 |
| ·酶的精制 | 第18-19页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第18页 |
| ·离子交换层析 | 第18-19页 |
| ·疏水层析 | 第19页 |
| ·亲和色谱 | 第19页 |
| ·酶固定化技术研究进展 | 第19-23页 |
| ·固定化酶简介 | 第19-20页 |
| ·固定化酶的方法 | 第20-22页 |
| ·吸附法 | 第20-21页 |
| ·包埋法 | 第21页 |
| ·交联法 | 第21页 |
| ·共价结合法 | 第21-22页 |
| ·各种固定化方法的比较 | 第22-23页 |
| ·本文工作的意义和主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 N-氨甲酰水解酶的分离纯化 | 第24-34页 |
| ·引言 | 第24-25页 |
| ·材料与方法 | 第25-27页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·酶活测定 | 第26页 |
| ·蛋白总量测定 | 第26页 |
| ·电泳纯度鉴定分析 | 第26-27页 |
| ·氨基酸和N-氨甲酰氨基酸的检测 | 第27页 |
| ·纯化方法 | 第27页 |
| ·N-氨甲酰氨基酸水解酶的分离纯化 | 第27-33页 |
| ·细胞破碎 | 第27-29页 |
| ·(NH4)2SO4沉淀 | 第29-30页 |
| ·疏水层析 | 第30页 |
| ·G200分子筛凝胶过滤 | 第30-31页 |
| ·SOURCETM 15Q强阴离子交换 | 第31-32页 |
| ·纯化结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 N-氨甲酰水解酶的酶学性质研究 | 第34-43页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·实验试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-36页 |
| ·基本动力学常数Km及最大反应速度Vm的测定 | 第35页 |
| ·温度的对酶活影响 | 第35-36页 |
| ·最适pH测定 | 第36页 |
| ·酶的稳定性 | 第36页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第36页 |
| ·巯基试剂对该酶催化的影响 | 第36页 |
| ·实验结果 | 第36-42页 |
| ·基本动力学常数Km及最大反应速度Vm的测定 | 第36-38页 |
| ·温度的对酶活影响 | 第38页 |
| ·最适pH测定 | 第38-39页 |
| ·EDTA对酶活的影响 | 第39页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第39-40页 |
| ·酶的稳定性 | 第40-41页 |
| ·巯基试剂对酶活的影响 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 N-氨甲酰水解酶的固定化及其性质研究 | 第43-55页 |
| ·材料与方法 | 第44-47页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·酶的制备 | 第45页 |
| ·游离酶活性的测定方法 | 第45页 |
| ·固定化酶活性的测定方法 | 第45页 |
| ·固定化酶的活力的回收 | 第45页 |
| ·固定化酶半衰期的测定 | 第45-46页 |
| ·环氧基载体的氨化 | 第46页 |
| ·EDC的配制 | 第46页 |
| ·固定化方法 | 第46页 |
| ·蛋白固定率的计算 | 第46-47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-51页 |
| ·固定化时间的确定 | 第47-48页 |
| ·氨基载体固定化时间的确定 | 第47-48页 |
| ·环氧基载体固定化时间的确定 | 第48页 |
| ·酶液浓度的确定 | 第48-51页 |
| ·氨基载体固定化时蛋白浓度的影响 | 第48-49页 |
| ·环氧基载体固定时蛋白浓度的影响 | 第49-50页 |
| ·EDC量的确定 | 第50-51页 |
| ·固定化酶的性质研究 | 第51-54页 |
| ·固定化酶的最适作用pH值 | 第51-52页 |
| ·环氧基载体固定化酶的最适pH | 第51页 |
| ·氨基载体固定化酶的最适pH | 第51-52页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第52-54页 |
| ·温度对环氧基载体固定化酶的影响 | 第52-53页 |
| ·温度对氨基载体固定化酶的影响 | 第53页 |
| ·固定化酶的保存和使用稳定性 | 第53-54页 |
| ·结论 | 第54-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-57页 |
| ·结论 | 第55-56页 |
| ·展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 论文发表 | 第62-63页 |
| 致 谢 | 第63页 |
