| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一部分 实验研究 | 第15-67页 |
| 第一章 MyoG启动子序列克隆及肌肉特异表达载体的构建 | 第15-32页 |
| 第一节 山羊MyoG启动子克隆和表达载体的构建 | 第16-22页 |
| 1. 材料 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第16页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第16页 |
| ·菌种和质粒 | 第16-17页 |
| ·组织材料 | 第17页 |
| ·基因合成与测序 | 第17页 |
| 2. 方法 | 第17-21页 |
| ·山羊MyoG启动子的克隆及序列分析 | 第17-20页 |
| ·山羊成纤维细胞总DNA的提取 | 第17页 |
| ·山羊MyoG启动子序列PCR扩增 | 第17-19页 |
| ·PCR产物的胶回收纯化 | 第19页 |
| ·PCR产物与pMD19T载体连接和测序 | 第19-20页 |
| ·表达载体pDsRed-GoatMyoG的构建 | 第20-21页 |
| 3. 结果 | 第21-22页 |
| ·山羊成纤维细胞总DNA的提取 | 第21页 |
| ·山羊MyoG启动子的克隆及序列分析 | 第21-22页 |
| ·表达载体pDsRed-GoatMyoG的构建 | 第22页 |
| 第二节 牛MyoG启动子克隆和表达载体的构建 | 第22-28页 |
| 1. 材料 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第23页 |
| ·菌种、质粒和组织材料 | 第23页 |
| 2. 方法 | 第23-26页 |
| ·牛MyoG启动子的克隆及序列分析 | 第23-26页 |
| ·牛成纤维细胞总DNA的提取 | 第23页 |
| ·牛MyoG启动子的PCR扩增 | 第23-25页 |
| ·PCR产物的胶回收纯化 | 第25页 |
| ·PCR产物与pMD19T载体连接和测序 | 第25-26页 |
| ·表达载体pDsRed-BosMyoG的构建 | 第26页 |
| 3. 结果 | 第26-28页 |
| ·牛成纤维细胞总DNA的提取 | 第26页 |
| ·牛MyoG启动子的克隆及序列分析 | 第26-27页 |
| ·表达载体pDsRed-BosMyoG的构建 | 第27-28页 |
| 讨论 | 第28-30页 |
| 参考文献 | 第30-32页 |
| 第二章 MyoG启动子肌肉特异性活性检测 | 第32-61页 |
| 第一节 MyoG启动子在绵羊体外培养细胞中的活性检测 | 第33-51页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-41页 |
| ·细胞培养 | 第34-36页 |
| ·绵羊胎儿成纤维细胞的培养 | 第34-35页 |
| ·绵羊胎儿肌肉卫星细胞的培养 | 第35-36页 |
| ·肌管细胞的诱导 | 第36页 |
| ·pDsRed-GoatMyoG和pDsRed-BosMyoG转染肌肉细胞 | 第36-37页 |
| ·表达载体pDsRed-GoatMyoG和pDsRed-BosMyoG的纯化与质粒线性化 | 第36页 |
| ·肌肉卫星细胞转染条件的优化 | 第36-37页 |
| ·细胞转染和筛选 | 第37页 |
| ·转基因细胞的实时定量PCR检测 | 第37-39页 |
| ·转基因细胞总RNA提取 | 第37页 |
| ·反转录反应(RT-PCR) | 第37-38页 |
| ·实时定量PCR检测 | 第38-39页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线、熔解曲线及扩增曲线绘制 | 第39页 |
| ·转基因细胞的Western Blot检测 | 第39-41页 |
| ·溶液配制 | 第40页 |
| ·Western Blot检测标记蛋白表达 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-51页 |
| ·肌肉卫星细胞的转染条件优化 | 第41-42页 |
| ·转基因细胞的观察 | 第42-46页 |
| ·转基因细胞的实时定量PCR检测 | 第46-50页 |
| ·RT-PCR产物的特异性检测 | 第46-49页 |
| ·DsRed基因mRNA在绵羊胎儿肌管细胞中的表达检测 | 第49-50页 |
| ·转基因细胞的Western Blot检测 | 第50-51页 |
| 第二节 MyoG启动子在小鼠肌肉组织内启动活性检测 | 第51-57页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| ·小鼠肌肉注射 | 第51-52页 |
| ·实时PCR检测不同组织DsRed基因mRNA的表达 | 第52页 |
| ·鼠组织总RNA提取 | 第52页 |
| ·实时定量PCR检测 | 第52页 |
| ·免疫组化检测小鼠不同组织内DsRed蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·DsRed基因mRNA在小鼠不同组织中的表达 | 第53-56页 |
| ·RT-PCR产物的特异性检测 | 第53-55页 |
| ·DsRed基因mRNA在小鼠不同组织中的表达 | 第55-56页 |
| ·免疫组化检测小鼠不同组织中红色荧光蛋白的表达 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 图版 | 第62-67页 |
| 第二部分 文献综述 | 第67-81页 |
| 1. 肌肉发育调控相关因子 | 第67-70页 |
| 2. 肌细胞生成素基因的研究进展 | 第70-72页 |
| 3. 肌肉发育调控因子的应用 | 第72-75页 |
| 4. 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82页 |
