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家养野猪源猪圆环病毒2型安徽株的分离鉴定及其特性研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-7页
主要缩略语列表第7-8页
目录第8-12页
插图和附表清单第12-14页
文献综述第14-25页
 1 PCV2基本结构与特性第14-15页
   ·PCV2的发现与分类地位第14-15页
   ·PCV2的形态特征及理化特性第15页
   ·PCV2培养特性第15页
 2 PCV2分子遗传特征第15-18页
   ·PCV2基因组结构第15-16页
   ·PCV2遗传与变异第16-17页
   ·ORF1 基因与编码蛋白第17页
   ·ORF2 基因与编码蛋白第17-18页
   ·ORF3 基因与编码蛋白第18页
 3 PCV2感染和致病机制第18-20页
   ·PCV2的组织亲嗜性及靶细胞第18-19页
   ·PCV2的致病机理第19-20页
     ·PCV2对淋巴组织和淋巴细胞的影响第19-20页
     ·PCV2在细胞因子对免疫调节中的影响第20页
 4 流行病学特点第20-22页
   ·PCV2感染的流行病学调查第20-21页
   ·PCV2流行毒株序列分析第21页
   ·传染源及传播途径第21页
   ·宿主及易感动物第21-22页
 5 PCV2感染的相关临床症状及病理变化第22页
 6 PCVAD 检测与防治第22-24页
   ·PCV2检测技术第22-23页
   ·PCVAD 的防治第23-24页
 7 结语第24-25页
1 引言第25-26页
2 材料与方法第26-37页
   ·材料第26-29页
     ·家养野猪病例分析第26页
     ·病料第26页
     ·细胞第26页
     ·PCV2标准毒株、PCV2安徽分离株第26页
     ·PCV2阳性血清、阴性血清第26页
     ·试验动物第26页
     ·载体、菌种及分子生物学试剂第26-27页
     ·溶液和培养基的配制第27-28页
       ·细胞培养相关溶液配制第27页
       ·DNA 提取相关溶液配制第27页
       ·PCR 相关溶液配制第27-28页
       ·间接免疫荧光试验相关溶液配制第28页
     ·主要仪器第28-29页
     ·引物和探针序列第29页
   ·方法第29-37页
     ·病料检测第29-30页
       ·病料的处理第29-30页
       ·病料总 DNA 的提取第30页
       ·病料中 PCV2特异性基因片段的扩增第30页
     ·病料中 PCV2的分离鉴定第30-31页
       ·PCV2的分离第30页
       ·PCR 检测第30页
       ·间接免疫荧光试验第30-31页
       ·电镜观察第31页
     ·PCV2全基因组序列克隆与测定第31-33页
       ·PCV2全基因组序列 PCR 扩增第31页
       ·PCV2全基因组序列 PCR 扩增产物纯化与回收第31-32页
       ·外源 DNA 片段与质粒载体的连接反应第32页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)第32页
       ·重组质粒转化第32页
       ·质粒 DNA 小量制备第32-33页
       ·重组质粒的 PCR 鉴定第33页
       ·PCV2全基因组序列测定第33页
     ·YZ0901 株分子遗传特征分析第33页
       ·YZ0901 株全基因组序列分析第33页
       ·PCV2安徽分离株同源重组分析第33页
       ·YZ0901 株与国内外参考毒株的 ORF1、ORF2 序列分析第33页
     ·TaqMan 荧光定量 PCR 检测 PCV2方法的建立及应用第33-34页
       ·标准品的制备第33-34页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法反应体系和反应条件优化第34页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法标准品的建立第34页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法敏感性试验第34页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法特异性试验第34页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法重复性试验第34页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法的临床应用第34页
     ·YZ0901 株对小鼠致病力试验第34-37页
       ·半数细胞感染量(TCID50)测定第34-35页
       ·昆明小鼠分组及攻毒方法第35页
       ·血清中 PCV2的抗体检测第35页
       ·血清中细胞因子检测第35页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 对 PCV2组织亲嗜性检测第35页
       ·组织病理切片制作与观察第35-37页
3 结果与分析第37-54页
   ·病料检测第37页
   ·病料中 PCV2的分离鉴定第37-38页
     ·PCR 检测第37-38页
     ·间接免疫荧光试验结果第38页
     ·电镜观察结果第38页
   ·PCV2全基因组序列克隆第38-39页
     ·全基因组序列 PCR 扩增结果第38-39页
     ·重组质粒的鉴定第39页
   ·PCV2全基因组序列测定:第39-40页
   ·YZ0901 株分子遗传特征分析第40-44页
     ·YZ0901 株全基因组序列同源性分析第40页
     ·YZ0901 株全基因组序列进化树分析第40-41页
     ·同源重组分析第41-42页
     ·YZ0901 株的 ORF1 核苷酸序列同源性分析第42页
     ·YZ0901 株的 ORF2 核苷酸序列同源性分析第42页
     ·YZ0901 株的 ORF2 氨基酸序列同源性分析第42-44页
   ·TaqMan 荧光定量 PCR 检测 PCV2方法的建立及应用第44-47页
     ·标准品的制备第44-47页
       ·PCR 扩增与克隆结果第44-45页
       ·PCR 产物的测序结果第45页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法反应体系和反应条件优化第45页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法标准品的建立第45-46页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法敏感性试验第46页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 特异性试验第46-47页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 重复性试验第47页
       ·TaqMan 荧光定量 PCR 方法的初步应用第47页
   ·YZ0901 株对小鼠致病力试验第47-54页
     ·TCID50 测定第47页
     ·血清中 PCV2的抗体检测第47-48页
     ·血清中细胞因子检测第48-50页
     ·TaqMan 荧光定量 PCR 对 PCV2组织亲嗜性检测第50-51页
     ·组织病理切片的制作与观察第51-54页
4. 讨论第54-61页
   ·TaqMan 荧光定量 PCR 检测 PCV2方法的建立及应用第54-55页
   ·家养野猪源安徽分离株的分离与鉴定第55页
   ·YZ0901 株全基因组序列分析第55-56页
   ·同源重组分析第56页
   ·YZ0901 株的 ORF1、ORF2 核苷酸序列分析第56页
   ·YZ0901 株的 ORF2 氨基酸序列分析第56-57页
   ·YZ09101 株对小鼠致病力试验第57-61页
     ·YZ0901 株与家猪源 PCV2毒株感染小鼠的抗体及细胞因子水平分析第57-59页
     ·YZ0901 株与家猪源 PCV2毒株感染小鼠的组织亲嗜性分析第59-61页
结论第61-62页
参考文献第62-72页
附录第72-73页
致谢第73-74页
个人简介第74页

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