| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 1 引言 | 第7-17页 |
| ·4.5S RNA的研究背景 | 第7-9页 |
| ·核内小RNA分子的研究进展 | 第9-10页 |
| ·逆转座子的研究概况 | 第10-12页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第12-16页 |
| ·实时定量PCR的应用现状 | 第12-13页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的基本原理 | 第13-15页 |
| ·内参基因的选择 | 第15-16页 |
| ·几种野生鼠的研究概况 | 第16-17页 |
| ·研究目的和意义 | 第17页 |
| 2 实验试剂和设备 | 第17-19页 |
| ·实验药品和试剂 | 第17-18页 |
| ·实验仪器和设备 | 第18-19页 |
| 3. 实验方法和步骤 | 第19-24页 |
| ·几种鼠4.5S RNA基因的克隆 | 第19-24页 |
| ·黑线仓鼠肝细胞总RNA提取 | 第19-20页 |
| ·内参GAPDH基因以及4.5S RNA基因引物设计 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR反应体系确定 | 第21-22页 |
| ·目的片段的扩增和纯化 | 第22-23页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第23页 |
| ·PCR法检测插入片断 | 第23-24页 |
| ·测序 | 第24页 |
| ·标准品的制备 | 第24页 |
| 4 结果与分析 | 第24-32页 |
| ·几种鼠4.5S RNA基因的克隆以及扩增效率分析 | 第24-27页 |
| ·黑线仓鼠RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第25页 |
| ·大仓鼠目的基因PCR对应的融解曲线 | 第25-26页 |
| ·大仓鼠的标准品、目的基因以及内参基因的扩增曲线 | 第26-27页 |
| ·标准品的制备 | 第27页 |
| ·几种鼠4.5S RNA阳性质粒DNA拷贝数的计算 | 第27页 |
| ·几种鼠4.5S RNA荧光定量PCR标准品的建立 | 第27页 |
| ·几种鼠的Real-time PCR绝对定量标准曲线 | 第27-32页 |
| ·黑线仓鼠的Real-time PCR绝对定量标准曲线及拷贝数分析 | 第28-29页 |
| ·黑线姬鼠的Real-time PCR绝对定量标准曲线及拷贝数分析 | 第29-30页 |
| ·大仓鼠的Real-time PCR绝对定量标准曲线及拷贝数分析 | 第30-31页 |
| ·褐家鼠的Real-time PCR绝对定量标准曲线及拷贝数分析 | 第31-32页 |
| ·小家鼠的Real-time PCR绝对定量标准曲线及拷贝数分析 | 第32页 |
| 5 讨论 | 第32-37页 |
| ·实验条件的讨论 | 第32-36页 |
| ·如何提取高质量的RNA | 第32-33页 |
| ·实时定量中关于绝对定量和相对定量的选择 | 第33-34页 |
| ·重复性问题 | 第34页 |
| ·M_g~(2+)浓度 | 第34-35页 |
| ·循环数 | 第35页 |
| ·反应体系中形成的引物二聚体的影响 | 第35页 |
| ·实时定量的操作注意事项 | 第35-36页 |
| ·4.5S RNA逆转座子在被测动物基因组中拷贝数差异的比 较 | 第36-37页 |
| 6 结论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 在校期间发表的学术论文及会议摘要 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
