| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-6页 |
| 引言 | 第6-7页 |
| 第一章 实验材料 | 第7-9页 |
| ·实验器材 | 第7页 |
| ·实验细胞 | 第7页 |
| ·实验试剂 | 第7-8页 |
| ·质粒及引物合成与测序 | 第8-9页 |
| 第二章 实验方法 | 第9-22页 |
| ·重组真核表达载体pEGFP-C3-n-3的构建 | 第9-16页 |
| ·小球藻n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因CvFad3的RT-PCR扩增 | 第9-11页 |
| ·重组质粒pEGFP-C3-n-3的构建 | 第11-12页 |
| ·载体和目的片段的纯化方法 | 第12-14页 |
| ·感受态细菌的制备与重组质粒的转化 | 第14页 |
| ·重组质粒的提取 | 第14-15页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第15-16页 |
| ·重组质粒的DNA测序鉴定 | 第16页 |
| ·细胞培养及重组质粒转染 | 第16-17页 |
| ·细胞培养方法 | 第16页 |
| ·用于转染的重组质粒的制备 | 第16-17页 |
| ·重组质粒的转染 | 第17页 |
| ·RNA分析 | 第17-19页 |
| ·总RNA的提取 | 第17-18页 |
| ·RT-PCR | 第18-19页 |
| ·MTT法测定细胞增殖率 | 第19-20页 |
| ·细胞周期和细胞凋亡的检测 | 第20-21页 |
| ·细胞周期的检测 | 第20页 |
| ·细胞凋亡的检测 | 第20-21页 |
| ·脂肪酸分析 | 第21页 |
| ·数据分析 | 第21-22页 |
| 第三章 实验结果 | 第22-28页 |
| ·提取的小球藻RNA的完整性及RT-PCR扩增的CvFad3基因 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pEGFP-C3-n-3的构建、酶切鉴定及DNA序列测定结果 | 第23页 |
| ·转染48h后CvFad3基因在MCF-7细胞中的表达 | 第23-24页 |
| ·转染48h后MCF-7细胞增殖率的变化 | 第24-25页 |
| ·转染后48h MCF-7细胞周期与细胞凋亡分析 | 第25-26页 |
| ·转染48h后MCF-7细胞n-6/n-3 PUFAs比例的变化 | 第26-28页 |
| 第四章 实验讨论 | 第28-30页 |
| 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 综述 | 第33-39页 |
| 参考文献 | 第37-39页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
