| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-23页 |
| 縮写词简表 | 第23-25页 |
| 前言 | 第25-28页 |
| 技术路线图 | 第28-32页 |
| 人类胚胎干细胞培养及HESRG在hES细胞中表达 | 第28-29页 |
| 利用Si-RNA干扰技术研究HESRG在hES细胞中的功能 | 第29-30页 |
| WNT信号通路与HESRG | 第30-31页 |
| HESRG在颅内生殖细胞类肿瘤中的表达 | 第31-32页 |
| 第一章 人胚胎干细胞培养鉴定以及HESRG的表达 | 第32-62页 |
| 第一节 材料与方法 | 第32-40页 |
| 1. 实验材料与试剂 | 第32-34页 |
| 2. 方法 | 第34-40页 |
| 第二节 结果 | 第40-48页 |
| 1. 人类胚胎干细胞培养 | 第40-42页 |
| 2. 人胚胎干细胞未分化标志物染色 | 第42-43页 |
| 3. RT-PCR、Real-time PCR检测HESRG在人胚胎干细胞中的表达 | 第43-44页 |
| 4. 间接免疫荧光检测HESRG在人胚胎干细胞及小鼠胚胎干细胞中的表达 | 第44-46页 |
| 5. RT-PCR、Real-time PCR检测HESRG在自发分化的人胚胎干细胞中的表达 | 第46-47页 |
| 6. 间接免疫荧光检测HESRG在自发分化的人胚胎干细胞中的表达 | 第47-48页 |
| 第三节 讨论 | 第48-57页 |
| 实验研究的胚胎干细胞细胞模型的特征 | 第49-50页 |
| 人胚胎干细胞H1及H9系 | 第50-51页 |
| 人胚胎干细胞培养过程中的提醒 | 第51页 |
| hES细胞细胞状态恶化的评价 | 第51-52页 |
| MEF饲养层细胞制备过程的注意事项 | 第52-53页 |
| hES细胞传代时机的选择 | 第53-54页 |
| 人胚胎干细胞自我复制及亚全能性维持的分子机制 | 第54-56页 |
| 人胚胎干细胞相关基因HESRG | 第56页 |
| HESRG在人胚胎干细胞中的表达 | 第56-57页 |
| 第四节 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 第二章 利用化学合成的siRNA干扰技术研究HESRG在人胚胎干细胞中的功能 | 第62-85页 |
| 第一节 材料和方法 | 第62-64页 |
| 1. 实验材料与试剂 | 第62-63页 |
| 2. 方法 | 第63-64页 |
| 第二节 结果 | 第64-72页 |
| 1. Si-HESRG特异性干扰HESRG的干扰效率 | 第64-66页 |
| 2. HESRG表达下调后hES细胞的形态学改变 | 第66-68页 |
| 3. Real-time PCR检测HESRG下调后48小时神经分化标志物的表达 | 第68-69页 |
| 4. 免疫荧光检测HESRG下调后48小时神经分化标志物的表达 | 第69页 |
| 5. 免疫荧光检测HESRG下调后12天神经分化标志物的表达 | 第69-72页 |
| 第三节 讨论与分析 | 第72-80页 |
| HERSG参与hES细胞的自我更新和亚全能性维持 | 第72页 |
| HESRG抑制hES细胞神经分化 | 第72-77页 |
| HESRG通过抑制hES细胞的神经谱系分化维持hES细胞的自我更新及多潜能性 | 第77页 |
| HESRG参与ES细胞自我更新及亚全能性维持的分子机制模型 | 第77-79页 |
| BMP途径可能通过HESRG对hES细胞的神经分化产生影响 | 第79-80页 |
| 第四节 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 第三章 WNT信号通路对HESRG的调控研究 | 第85-123页 |
| 第一节 材料与方法 | 第85-95页 |
| 1. 实验材料与试剂 | 第85-88页 |
| 2. 方法 | 第88-95页 |
| 第二节 结果 | 第95-110页 |
| 1. HESRG转录起始位点上游2000bp序列WNT信号通路转录因子结合位点的生物信息学预测 | 第95-98页 |
| 2. GSK-3特异性竞争性抑制剂BIO维持hES细胞未分化状态及HESRG的高表达 | 第98-102页 |
| 3. 荧光素酶报告质粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp的载体构建过程 | 第102-104页 |
| 4. 转染pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp于hES细胞测定HESRG启动子区域活性 | 第104-105页 |
| 5. BIO激活WNT信号通路维持HESRG启动子区域活性 | 第105页 |
| 6. TCF家族在hES细胞中的表达丰度 | 第105-106页 |
| 7. si-RNA干扰TCF-3的特异性靶位选择 | 第106-107页 |
| 8. 特异性干扰TCF-3维持HESRG的高表达水平 | 第107-108页 |
| 9. 共转染荧光素酶报告质粒pGL3-basic-HESRG upstream 2061bp及Si-TCF-3-1050 | 第108-109页 |
| 10. 核染色质免疫共沉淀(CHIP)确定TCF-3与HESRG基因启动子区域的结合 | 第109-110页 |
| 第三节 讨论 | 第110-119页 |
| TESS预测WNT信号通路对HESRG的调节作用 | 第110-111页 |
| 经典WNT信号通路 | 第111-113页 |
| GSK-3特异性抑制剂BIO激活WNT信号通路并维持HESRG在hES细胞中的表达 | 第113-115页 |
| WNT信号通路通过作用于HESRG启动子区域发挥维持HESRG的作用 | 第115页 |
| 利用焚光素酶报告载体质粒检测WNT信号通路对HESRG启动子区域的调控 | 第115-116页 |
| WNT信号通路对HESRG的调控通过作用于HESRG启动子区域的TCF蛋白产生 | 第116-118页 |
| 核染色质免疫共沉淀法提供WNT信号通路对HESRG直接调控的证据 | 第118-119页 |
| HESRG参与的信号通路 | 第119页 |
| 第四节 结论 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-123页 |
| 第四章 HESRG在颅内肿瘤中的表达研究 | 第123-140页 |
| 第一节 材料与方法 | 第123-125页 |
| 1. 组织标本 | 第123页 |
| 2. 组织切片 | 第123-124页 |
| 3. hES细胞培养 | 第124页 |
| 4. RT-PCR and Real-time PCR | 第124页 |
| 5. 免疫组织化学及免疫细胞化学 | 第124-125页 |
| 第二节 结果 | 第125-130页 |
| 1. RT-PCR检测HESRG在中枢神经系统中的表达分布情况 | 第125页 |
| 2. Real-time PCR检测HESRG在中枢神经系统中的表达分布情况 | 第125-130页 |
| 3. HESRG蛋白在中枢神经系统肿瘤中的表达 | 第130页 |
| 第三节 讨论 | 第130-135页 |
| 第四节 结论 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-140页 |
| 综述 | 第140-151页 |
| 参考文献 | 第146-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
