| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 一 引言 | 第12-21页 |
| 1 恶性肿瘤与蛋白酪氨酸激酶及其抑制剂 | 第12-16页 |
| 2. IGF1R 及其抑制剂 | 第16-20页 |
| 3 酪氨酸激酶筛选的活性检测评价方法及抑制剂的筛选 | 第20页 |
| 4 研究方案 | 第20-21页 |
| 二 实验材料与方法 | 第21-49页 |
| 1. IGF1R 胞内区蛋白的表达、纯化、蛋白活性分析 | 第21-30页 |
| ·质粒 | 第21-22页 |
| ·菌种和细胞 | 第22页 |
| ·试剂和实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| ·分子生物学常规实验方法 | 第24页 |
| ·酪氨酸激酶的激酶区蛋白的表达、纯化 | 第24-28页 |
| ·IGF1R 胞内区重组质粒的构建 | 第24-27页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第27页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| ·胞内区重组蛋白的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的活性分析 | 第29-30页 |
| 2. IGF1R 抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第30-34页 |
| ·试剂和实验材料 | 第32页 |
| ·阳性对照化合物 | 第32页 |
| ·实验仪器 | 第32页 |
| ·基于酶联免疫吸附法的酪氨酸激酶抑制剂筛选模型的建立 | 第32-34页 |
| 3. IGF1R 抑制剂分子水平的筛选及活性化合物苏木色素的抗肿 瘤作用研究 | 第34-43页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·试剂和耗材 | 第35页 |
| ·待筛化合物和阳性对照化合物 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35-36页 |
| ·细胞培养 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-43页 |
| ·基于酶联免疫法（ELISA）的酪氨酸激酶抑制剂分子水平筛选 | 第36-38页 |
| ·化合物筛选中各实验孔的设立 | 第36-37页 |
| ·化合物筛选中有效性评价标准 | 第37页 |
| ·筛选步骤 | 第37-38页 |
| ·Western Blot 检测 | 第38-39页 |
| ·抗体 | 第38页 |
| ·实验步骤 | 第38-39页 |
| ·细胞增殖抑制试验 | 第39-40页 |
| ·表面等离子共振（SPR）检测苏木色素和IGF1R 的亲和力 | 第40页 |
| ·分子对接 | 第40-41页 |
| ·HMEC-1 细胞迁移实验 | 第41页 |
| ·HMEC-1 细胞管腔形成实验 | 第41-42页 |
| ·大鼠动脉环实验 | 第42页 |
| ·CAM 血管生成模型 | 第42-43页 |
| 4 苏木色素的抗肿瘤细胞凋亡机制的研究 | 第43-49页 |
| ·药物和试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·细胞培养 | 第46页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖 | 第46页 |
| ·DAPI 染色法 | 第46-47页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第47页 |
| ·PI 单染法检测苏木色素引起HL60 细胞的凋亡 | 第47页 |
| ·Annexin-V/PI 双染检测苏木色素引起HL60 细胞凋亡 | 第47页 |
| ·Western Blot 检测 | 第47-49页 |
| ·抗体及试剂 | 第47-48页 |
| ·实验步骤 | 第48-49页 |
| 三 结果 | 第49-72页 |
| 1.IGF1R 胞内区蛋白的表达、纯化、蛋白活性分析 | 第49-53页 |
| ·胞内区表达质粒的构建 | 第49页 |
| ·重组Bacmid/IGF1R-CDde鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组IGF1R 蛋白的表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·重组IGF1R 蛋白的活性分析 | 第51-53页 |
| 2.IGF1R 抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第53-57页 |
| ·基于ELISA 原理酪氨酸激酶分子水平筛选模型的建立 | 第53-55页 |
| ·IGF1R 酪氨酸激酶抑制剂的筛选模型的建立和验证 | 第55-57页 |
| 3. IGF1R 抑制剂分子水平的筛选及活性化合物苏木色素的抗肿 瘤作用研究 | 第57-68页 |
| ·苏木色素对IGF1R 和IR 激酶活性的抑制作用 | 第57-58页 |
| ·苏木色素与IGF1R 有高亲和力 | 第58-59页 |
| ·对苏木色素和IGF-1R 酪氨酸激酶域的对接结合模式的分析 | 第59-60页 |
| ·细胞水平苏木色素对IGF1R 受体及其下游信号分子磷酸化的影响 | 第60-61页 |
| ·苏木色素影响HMEC-1 细胞的迁移 | 第61-63页 |
| ·苏木色素抑制HMEC-1 细胞管腔形成 | 第63-64页 |
| ·苏木色素抑制大鼠动脉环血管生成 | 第64-65页 |
| ·苏木色素抑制CAM 血管生成 | 第65-68页 |
| 4 苏木色素的抗肿瘤细胞凋亡机理的研究 | 第68-72页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖 | 第68页 |
| ·苏木色素在HL60 细胞上引起凋亡 | 第68-69页 |
| ·苏木色素诱导HL60细胞发生凋亡 | 第69-70页 |
| ·苏木色素激活capase-3-，8-，9，同时引起PARP.的切割增加 | 第70-72页 |
| 四 讨论 | 第72-80页 |
| 1.IGF1R 胞内区蛋白的表达、纯化、蛋白活性分析 | 第72-74页 |
| 2.IGF1R 抑制剂分子水平筛选模型的建立 | 第74-76页 |
| 3.IGF1R 抑制剂分子水平的筛选及活性化合物苏木色素的抗肿瘤作用研究 | 第76-79页 |
| 4 苏木色素的抗肿瘤细胞凋亡机制的研究 | 第79-80页 |
| 五 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间发表论文目录 | 第88页 |
