| 图片表格目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-15页 |
| 第一章 猪生长激素基因在毕赤巴斯德酵母中的表达 | 第15-30页 |
| 1 引言 | 第15页 |
| 2 材料方法 | 第15-22页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-22页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第17-19页 |
| ·重组质粒对毕赤巴斯德酵母的转化 | 第19-20页 |
| ·阳性转化子的抗性筛选和鉴定 | 第20-22页 |
| ·高拷贝转化子的筛选 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-27页 |
| ·PCR结果 | 第22-23页 |
| ·酵母表达质粒的构建及筛选 | 第23-25页 |
| ·电击转化和筛选 | 第25页 |
| ·阳性转化子的总DNAPCR | 第25-26页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-30页 |
| ·猪生长激素基因在生产中的应用现状 | 第27-28页 |
| ·表达载体的选择与构建 | 第28-29页 |
| ·外源基因在毕赤巴斯德酵母中的整合方式 | 第29页 |
| ·外源基因拷贝数与产物表达量的关系 | 第29-30页 |
| 第二章 重组猪生长激素蛋白纯化及活性研究 | 第30-37页 |
| 1 引言 | 第30页 |
| 2 材料方法 | 第30-32页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·仪器设备 | 第31页 |
| ·表达纯化所需溶液 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂 | 第31页 |
| ·Western印迹试剂 | 第31-32页 |
| 3 方法 | 第32-33页 |
| ·重组基因工程酵母的诱导表达 | 第32页 |
| ·表达蛋白的收集 | 第32页 |
| ·表达产物的Western印迹分析 | 第32-33页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE | 第32页 |
| ·表达产物的Western印迹分析 | 第32-33页 |
| ·小鼠促长试验 | 第33页 |
| ·试验样品制备 | 第33页 |
| ·试验小鼠分组 | 第33页 |
| ·小鼠体重检测, | 第33页 |
| 4 试验结果 | 第33-35页 |
| ·表达产物的Western印迹 | 第33-34页 |
| ·小鼠增重 | 第34-35页 |
| 5.讨论 | 第35-37页 |
| 参考文献： | 第37-40页 |
| 文献综述 | 第40-78页 |
| 猪生长激素研究及其应用 | 第41-54页 |
| 1 猪生长激素的结构、生理与功能 | 第41-45页 |
| ·猪生长激素的结构特点 | 第41页 |
| ·生长激素生理 | 第41-42页 |
| ·生长激素的生物学功能 | 第42-44页 |
| ·促进生长作用 | 第42-43页 |
| ·促进代谢作用 | 第43页 |
| ·GH对内分泌腺体的作用 | 第43页 |
| ·GH对生殖功能的作用 | 第43-44页 |
| ·养猪业中生长激素的生物学功能表现 | 第44-45页 |
| ·促进蛋白质合成和沉积 | 第44页 |
| ·加速脂肪的降解,抑制脂肪的合成 | 第44-45页 |
| ·调节糖代谢 | 第45页 |
| 2 外源猪生长激素的合成 | 第45-48页 |
| ·猪生长激素在大肠杆菌中的表达 | 第45-46页 |
| ·在芽胞杆菌中的表达 | 第46-47页 |
| ·pGH在Bm—N细胞中的表达 | 第47页 |
| ·pGH在COS7细胞中的表达 | 第47-48页 |
| ·pGH在酵母中的表达 | 第48页 |
| 3 生长激素的使用方法 | 第48-49页 |
| ·fb6成缓冲剂——注射法 | 第48-49页 |
| ·制成缓释剂——埋植法 | 第49页 |
| ·免疫法 | 第49页 |
| 4 动物生长激素的安全性 | 第49-50页 |
| ·动物激素在人体内活性 | 第49页 |
| ·蛋白药物口服无活性 | 第49页 |
| ·毒性作用 | 第49-50页 |
| ·激素残留量 | 第50页 |
| 5 pGH的应用前景 | 第50-52页 |
| 参考资料 | 第52-54页 |
| 酵母表达系统的研究概况 | 第54-78页 |
| 1 酿酒酵母的研究情况 | 第54-58页 |
| ·用于酵母基因表达的两类载体 | 第54-55页 |
| ·Yip(yeast integration pLasmid)型载体 | 第54页 |
| ·YEp(yeast episomaL pLasmid)型载体 | 第54-55页 |
| ·用于基因表达的宿主菌—酿酒酵母 | 第55页 |
| ·酿酒酵母基因表达系统研究现状及其优缺点 | 第55-56页 |
| ·酿酒酵母表达系统高效表达外源基因的策略 | 第56-57页 |
| ·酿酒酵母表达系统的应用及前景 | 第57-58页 |
| 2 毕赤酵母的研究情况 | 第58-62页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第58页 |
| ·宿主菌株 | 第58-59页 |
| ·酵母表达载体 | 第59-61页 |
| ·载体的结构特点 | 第59-60页 |
| ·载体的类型 | 第60-61页 |
| ·载体的选择标志 | 第61页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第61-62页 |
| ·异源蛋白在酵母中表达的一般步骤 | 第61页 |
| ·重组蛋白的翻译后修饰 | 第61-62页 |
| ·应用与前景 | 第62页 |
| 3 裂殖酵母的研究情况 | 第62-69页 |
| ·裂殖酵母作为宿主的特性 | 第63-65页 |
| ·用酵母作为宿主的表达系统 | 第65页 |
| ·裂殖酵母中的表达载体 | 第65-67页 |
| ·裂殖酵母表达外源蛋白的实例 | 第67-68页 |
| ·胞质蛋白 | 第67-68页 |
| ·膜蛋白 | 第68页 |
| ·分泌蛋白 | 第68页 |
| ·发展前景 | 第68-69页 |
| 4 耶氏酵母的研究概况 | 第69-72页 |
| ·载体一宿主系统 | 第69-70页 |
| ·载体 | 第69-70页 |
| ·宿主和转化 | 第70页 |
| ·表达元件及应用 | 第70-72页 |
| 参考资料 | 第72-78页 |