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农杆菌及基因枪法介导的BAR基因在高羊茅中的遗传转化效率研究

摘要第1-4页
Summary第4-11页
一、文献综述第11-29页
 1. 植物转基因技术的研究进展第12-24页
   ·遗传转化的受体系统第12-15页
     ·愈伤组织的培养第13页
     ·悬浮细胞的培养第13-14页
     ·原生质体培养第14页
     ·花药培养第14-15页
     ·茎尖培养第15页
   ·植物的遗传转化方法第15-20页
     ·原生质体直接吸入法第15-16页
     ·基因枪转化法第16-18页
     ·农杆菌转化法第18-19页
     ·硅碳纤维介导法第19-20页
     ·花粉管通道法第20页
     ·电激法第20页
     ·PEG 法第20页
   ·外源基因在转基因植株中的表达第20-21页
   ·转基因植物的筛选和鉴定第21-24页
     ·报告基因第21-22页
     ·选择标记基因第22-23页
     ·转基因植物的分子生物学检测第23-24页
 2. 转基因技术在牧草及草坪草育种中的应用第24-27页
   ·提高抗逆性第24页
   ·提高抗病虫害的能力第24-25页
   ·改良抗除草剂性能第25-26页
   ·调控花粉过敏源第26页
   ·改良品质第26-27页
 3. 草坪草及牧草遗传转化中所存在的问题及应用前景第27-28页
 4. 工作的目的和意义第28-29页
二、材料与方法第29-42页
 1. 实验材料第29页
   ·植物材料第29页
   ·培养基第29页
 2. 实验方法第29-42页
   ·高羊茅成熟胚离体再生体系的建立第29-30页
     ·高羊茅种子的消毒第29页
     ·愈伤组织的诱导和继代第29-30页
     ·愈伤组织的再生第30页
     ·数据统计第30页
   ·基因枪法对高羊茅进行bar 基因遗传转化第30-33页
     ·植物材料第30页
     ·质粒的构建第30页
     ·质粒的提取第30-31页
     ·质粒的电泳检测及浓度测定第31-32页
     ·金粉的准备第32页
     ·DNA 的包被第32页
     ·轰击受体材料的准备第32页
     ·轰击过程第32页
     ·抗性愈伤的筛选以及转化植株的再生第32-33页
   ·农杆菌法对高羊茅进行bar 基因的遗传转化第33-34页
     ·植物材料及菌株第33页
     ·质粒载体的构造第33页
     ·农杆菌的培养第33页
     ·转化受体材料的准备第33页
     ·农杆菌浸染过程第33-34页
     ·转化体的筛选及再生第34页
   ·β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因表达检测第34页
     ·β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因的瞬时表达分析第34页
     ·β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因的稳定表达分析第34页
     ·β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)基因在转化植株中的表达分析第34页
   ·转基因植株的RT-PCR 分析第34-37页
     ·植物RNA 的提取第35-36页
     ·反转录(Reverse transcription,RT)第36页
     ·PCR 扩增第36-37页
   ·转化植株的Southern 杂交分析第37-42页
     ·植物总DNA 的提取第37-39页
     ·Southern 杂交第39-42页
三、结果与分析第42-51页
 1. 高羊茅离体再生体系的建立第42-44页
 2.高羊茅 bar 基因的遗传转化及转基因植株的筛选第44-51页
   ·GUS 基因表达情况第44-46页
   ·抗性愈伤及植株的筛选第46页
   ·两种转化方法的转化效率第46-48页
   ·抗性植株的分子生物学检测第48-51页
四、结论第51-52页
五、讨论第52-56页
 1. 高羊茅离体再生体系的优化第52页
 2.农杆菌法和基因枪法转化结果的比较分析第52-56页
参考文献第56-64页
致谢第64-65页
个人简介第65-66页
导师简介第66-67页

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