| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| ·建兰花叶病毒病和齿兰环斑病毒病的发生与分布 | 第13页 |
| ·建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的检测技术 | 第13-15页 |
| ·生物学检测 | 第14页 |
| ·电镜技术 | 第14页 |
| ·清学检测 | 第14页 |
| ·分子生物学检测 | 第14-15页 |
| ·建兰花叶病毒病和齿兰环斑病毒病的防治研究 | 第15-16页 |
| ·常规防治 | 第15页 |
| ·转基因抗病毒研究 | 第15-16页 |
| ·建兰花叶病毒研究进展 | 第16-17页 |
| ·分类地位 | 第16页 |
| ·生物学特性 | 第16-17页 |
| ·病毒粒体结构与特性 | 第16页 |
| ·症状与细胞病理 | 第16-17页 |
| ·传播方式与寄主范围 | 第17页 |
| ·病毒基因组结构与功能 | 第17页 |
| ·齿兰环斑病毒研究进展 | 第17-19页 |
| ·分类地位 | 第18页 |
| ·生物学特性 | 第18-19页 |
| ·病毒粒体结构与特性 | 第18页 |
| ·症状与细胞病理 | 第18页 |
| ·传播方式与寄主范围 | 第18-19页 |
| ·病毒基因组结构与功能 | 第19页 |
| ·本研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·CyMV和ORSV病毒粒体抗血清的制备 | 第21-24页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·供试毒源 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-24页 |
| ·毒源鉴定 | 第21页 |
| ·单斑分离、毒源保存及寄主接种 | 第21页 |
| ·病毒提纯 | 第21-23页 |
| ·提纯病毒的紫外吸收检测 | 第23页 |
| ·电镜观察 | 第23-24页 |
| ·病毒粒体抗血清制备 | 第24页 |
| ·采血与抗血清保存 | 第24页 |
| ·CyMV和ORSV外壳蛋白基因的原核表达及其产物抗血清的制备 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·供试毒源 | 第24-25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·载体和菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要实验仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-33页 |
| ·植物总RNA提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第26-28页 |
| ·克隆操作 | 第28-31页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第31页 |
| ·序列测定与分析 | 第31页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE分析 | 第32页 |
| ·表达产物的超声波破碎与可溶性分析 | 第32页 |
| ·表达产物的纯化 | 第32-33页 |
| ·原核表达产物的抗血清制备 | 第33页 |
| ·抗血清的特性分析 | 第33-35页 |
| ·间接酶联免疫吸附检测技术的建立 | 第33-34页 |
| ·抗血清效价、工作浓度测定 | 第34页 |
| ·抗血清灵敏度测定 | 第34页 |
| ·抗血清特异性测定 | 第34页 |
| ·Western blot鉴定 | 第34-35页 |
| ·福建省蝴蝶兰病毒病随机抽样调查 | 第35-36页 |
| ·症状观察 | 第35页 |
| ·调查和采样方法 | 第35页 |
| ·样品检测及数据分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-51页 |
| ·毒源鉴定 | 第36-38页 |
| ·样品症状与ID-ELISA检测结果 | 第36页 |
| ·病毒提纯及电镜观察结果 | 第36-37页 |
| ·建兰花叶病毒 | 第36-37页 |
| ·齿兰环斑病毒 | 第37页 |
| ·CyMV和ORSV的鉴别寄主测定结果 | 第37-38页 |
| ·CyMV和ORSV病毒粒体抗血清效价 | 第38-39页 |
| ·基因的克隆与原核表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·外壳蛋白基因的RT-PCR扩增和克隆 | 第40-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第41页 |
| ·测序结果与序列分析 | 第41-43页 |
| ·CyMV和ORSV CP融合蛋白的诱导表达 | 第43-45页 |
| ·融合蛋白的分子量预测 | 第43页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第43页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第43-45页 |
| ·包涵体纯化 | 第45页 |
| ·原核表达产物的抗血清制备 | 第45-49页 |
| ·原核表达产物的抗血清 | 第45页 |
| ·抗血清的效价和工作浓度 | 第45-46页 |
| ·抗血清的灵敏度 | 第46-48页 |
| ·抗血清的特异性 | 第48-49页 |
| ·Western blot检测结果 | 第49页 |
| ·福建省蝴蝶兰组培苗病毒病调查结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·CyMV和ORSV的特性 | 第51页 |
| ·病毒颗粒和原核表达产物制备抗血清的制备差异 | 第51-53页 |
| ·抗血清的应用前景 | 第53-54页 |
| 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录1 CyMV福建漳州分离物CP基因ORF核甘酸序列部分Blast结果 | 第62-64页 |
| 附录2 CyMV福建漳州分离物CP基因ORF核甘酸序列部分Blast结果 | 第64-66页 |
| 附录3 主要试剂与缓冲液的配制 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
