| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1 牛白血病病毒与人类嗜T淋巴细胞病毒 | 第12-13页 |
| 2 EBL病原学研究 | 第13-16页 |
| ·病原分类 | 第13页 |
| ·BLV形态特征 | 第13页 |
| ·BLV化学组成 | 第13-14页 |
| ·BLV基因结构特征 | 第14-16页 |
| ·长末端重复序列(long terminal repeat,LTR) | 第14页 |
| ·gag基因 | 第14-15页 |
| ·pol基因 | 第15页 |
| ·ENV基因 | 第15-16页 |
| ·pX_(BL)序列 | 第16页 |
| ·BLV对外界环境的抵抗力 | 第16页 |
| 3 EBL流行病学特征 | 第16页 |
| ·易感动物及潜伏期 | 第16页 |
| ·发病率和死亡率 | 第16页 |
| 4 EBL的传播 | 第16-20页 |
| ·分泌物传播 | 第17页 |
| ·接触性传播 | 第17页 |
| ·寄生昆虫引起的传播 | 第17-18页 |
| ·血源性传播 | 第18-19页 |
| ·乳源性传播 | 第19页 |
| ·精液和胚胎移殖传播 | 第19页 |
| ·胎盘传播 | 第19-20页 |
| 5 EBL临床症状和病理变化 | 第20-21页 |
| ·临床症状 | 第20页 |
| ·病理变化 | 第20-21页 |
| 6 EBL诊断方法研究进展 | 第21-27页 |
| ·血液学变化 | 第21页 |
| ·病原分离 | 第21页 |
| ·动物试验 | 第21-22页 |
| ·合胞体试验 | 第22-23页 |
| ·放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA) | 第23页 |
| ·血清学诊断方法 | 第23-25页 |
| ·琼脂凝胶免疫扩散(agar gel immunodiffusion,AGID) | 第23-24页 |
| ·酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) | 第24-25页 |
| ·聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR) | 第25-26页 |
| ·Western-blot | 第26页 |
| ·PCR-ELISA | 第26-27页 |
| 7 EBL疫苗研究概况 | 第27页 |
| 8 EBL防治措施 | 第27-29页 |
| ·加强监测和检疫 | 第27页 |
| ·隔离饲养或淘汰 | 第27页 |
| ·消毒和灭蚊蝇 | 第27-28页 |
| ·培养健康牛群 | 第28页 |
| ·种公牛的管理和污染牛群犊牛的饲养 | 第28页 |
| ·对饲养人员的管理 | 第28-29页 |
| 第二章 BLV gp51基因的克隆 | 第29-42页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-35页 |
| ·试验材料 | 第29-30页 |
| ·细胞和质粒 | 第29-30页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第30页 |
| ·主要溶液的配制 | 第30-31页 |
| ·主要仪器与设备 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-35页 |
| ·BLV的增殖 | 第32页 |
| ·BLV DNA的提取 | 第32页 |
| ·BLV gp51基因PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·扩增产物的回收(按DNA片段回收试剂盒的说明步骤操作) | 第33页 |
| ·回收产物与pCR-Blunt载体的连接 | 第33页 |
| ·重组质粒的转化(以下操作均在无菌状态下进行) | 第33-34页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第34-35页 |
| ·测序与结果分析 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-40页 |
| ·BLV gp51基因PCR扩增 | 第35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·BLV gp51基因的序列测定 | 第36页 |
| ·序列测定分析 | 第36-40页 |
| 4 分析与讨论 | 第40-41页 |
| ·BLV gp51基因的扩增 | 第40页 |
| ·BLV gp51基因PCR扩增条件的优化 | 第40-41页 |
| ·BLV gp51基因的克隆 | 第41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 BLV gp51基因的原核表达与鉴定 | 第42-52页 |
| 1 研究目的与意义 | 第42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-48页 |
| ·菌株与质粒 | 第42页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第42-43页 |
| ·主要溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·主要仪器与设备 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-48页 |
| ·pCR-Blunt-gp51质粒的大量制备(碱裂解法) | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态的制备(CaCl_2法) | 第45页 |
| ·gp51基因与pET-32a原核表达载体的连接 | 第45页 |
| ·重组gp51的表达 | 第45-46页 |
| ·表达蛋白的Western-blot检测 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的大量表达与纯化 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-50页 |
| ·gp51基因与pET-32a原核表达载体的连接 | 第48页 |
| ·重组gp51的表达 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的Western-blot检测 | 第49页 |
| ·重组蛋白的大量表达与纯化 | 第49-50页 |
| 4 分析与讨论 | 第50-51页 |
| ·重组gp51蛋白的表达 | 第50页 |
| ·重组gp51蛋白的免疫原性 | 第50页 |
| ·重组gp51蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 第四章 牛白血病gp51-ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 | 第52-62页 |
| 1 研究目的和意义 | 第52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-56页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·血清、酶标抗体、血清样品和对比试剂盒 | 第52页 |
| ·ELISA主要试剂的配制 | 第52-53页 |
| ·主要实验器材 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·BLV-gp51的大量制备 | 第53页 |
| ·gp51-ELISA最佳工作条件的确定 | 第53-55页 |
| ·间接ELISA测定的基本实验步骤 | 第55页 |
| ·ELISA阴阳性界限的确定 | 第55页 |
| ·特异性试验 | 第55页 |
| ·比对试验 | 第55页 |
| ·血清样品的检测 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-60页 |
| ·抗原最佳包被浓度和阴阳性血清最佳稀释度的确定(方阵滴定) | 第56页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第56-57页 |
| ·封闭浓度的确定 | 第57页 |
| ·阴阳性血清最佳反应时间的确定 | 第57页 |
| ·酶标二抗的作用时间的确定 | 第57-58页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第58页 |
| ·间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第58页 |
| ·特异性试验 | 第58-59页 |
| ·交叉反应性 | 第58-59页 |
| ·阻断试验 | 第59页 |
| ·与现有试剂盒的比对试验 | 第59页 |
| ·血清样品ELISA检测结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论与结论 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
