| 提要 | 第1-8页 |
| 引言 | 第8-17页 |
| 材料与方法 | 第17-30页 |
| 1. 实验材料 | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·引物由上海生工生物工程有限公司合成 | 第17页 |
| ·质粒与菌株 | 第17-18页 |
| ·细胞株和实验动物 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-30页 |
| ·通过计算机进行表位分析和疫苗设计 | 第18-19页 |
| ·用PCR 搭建的方法构建基因片段A、B | 第19-20页 |
| ·基因片段A、B 的亚克隆 | 第20-22页 |
| ·酶切片段的回收 | 第20页 |
| ·线性化的载体碱性磷酸化 | 第20页 |
| ·连接反应 | 第20-21页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·重组质粒的转化 | 第21页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第21-22页 |
| ·RA2 的表达与纯化 | 第22-25页 |
| ·诱导RA2 表达及用WesternBlot 鉴定 | 第22-23页 |
| ·超声裂菌鉴定RA2 表达形式 | 第23页 |
| ·SDS－PAGE 电泳 | 第23-24页 |
| ·尿素变性裂解包涵体 | 第24页 |
| ·RA2 的纯化 | 第24-25页 |
| ·RA2 的稳定性观察 | 第25页 |
| ·功能实验 | 第25-30页 |
| ·RA2 免疫动物实验 | 第25-26页 |
| ·RA2 免疫豚鼠程序 | 第25页 |
| ·RA2 疫苗免疫牛程序 | 第25-26页 |
| ·RA2 疫苗免疫动物血清ELISA 检测 | 第26页 |
| ·RA2 疫苗免疫动物血清细胞中和实验 | 第26-28页 |
| ·RA2 疫苗免疫动物血清乳鼠中和实验 | 第28页 |
| ·牛体攻毒实验 | 第28-30页 |
| 实验结果 | 第30-51页 |
| 1. 计算机辅助疫苗设计与结构预测 | 第30-37页 |
| ·模板毒株的确定 | 第30-31页 |
| ·抗原表位的确定 | 第31-33页 |
| ·RA2 结构的确定 | 第33-37页 |
| 2. A、B 基因片段的构建 | 第37-38页 |
| 3. PET28A-RA2 表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| 4. RA2 的表达及表达方式鉴定 | 第39-41页 |
| 5. RA2 的纯化及稳定性观察 | 第41-43页 |
| 6. RA2 的功能实验 | 第43-51页 |
| ·RA2 在豚鼠体内诱生牛AsiaⅠ型FMDV 特异性抗体的作用 | 第43-46页 |
| ·RA2 免疫豚鼠血清中特异性抗体ELISA 检测 | 第43-44页 |
| ·RA2 免疫豚鼠血清中特异性中和抗体对细胞的保护作用 | 第44-45页 |
| ·RA2 免疫豚鼠血清中特异性中和抗体对乳鼠的保护作用 | 第45-46页 |
| ·RA2 刺激牛产生特异性抗体及诱导保护性免疫的作用 | 第46-51页 |
| ·RA2 免疫牛血清中特异性抗体ELISA 检测 | 第47-48页 |
| ·RA2 免疫豚鼠血清中特异性中和抗体对细胞的保护作用 | 第48页 |
| ·RA2 免疫牛血清中特异性中和抗体对乳鼠的保护作用 | 第48-50页 |
| ·牛体攻毒实验 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 中文摘要 | 第62-66页 |
| 英文摘要 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
