| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 猪圆环病毒研究进展 | 第13-31页 |
| ·猪圆环病毒概述 | 第13-22页 |
| ·猪圆环病毒的发现和命名 | 第13页 |
| ·猪圆环病毒的病毒学分类地位 | 第13-14页 |
| ·猪圆环病毒全球的流行和分布状况 | 第14-15页 |
| ·猪圆环病毒的特性 | 第15-16页 |
| ·猪圆环病毒的基因组 | 第16页 |
| ·猪圆环病毒的复制与转录 | 第16-17页 |
| ·猪圆环病毒编码蛋白的研究 | 第17-19页 |
| ·组织病理学研究 | 第19页 |
| ·PCV2 相关疾病 | 第19-22页 |
| ·猪2 型圆环病毒致病机理的研究进展 | 第22-26页 |
| ·猪圆环病毒免疫应答情况研究进展 | 第22-23页 |
| ·猪2 型圆环病毒致病机理的研究进展 | 第23-26页 |
| ·猪圆环病毒检测方法的研究进展 | 第26-28页 |
| ·病毒分离 | 第26页 |
| ·间接免疫荧光试验(Immol/Lune fluorescence assay，IIF) | 第26页 |
| ·聚合酶链反应(Polymerase chain reaction ，PCR) | 第26-27页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第27页 |
| ·原位核酸杂交试验(ISH) | 第27-28页 |
| ·PCV2 单克隆抗体的研究进展 | 第28-29页 |
| ·猪圆环病毒感染的防制 | 第29页 |
| ·论文设计思路及技术路线 | 第29-31页 |
| 第二章 猪2 型圆环病毒ORF2 基因的原核表达 | 第31-46页 |
| ·材料与方法 | 第31-35页 |
| ·菌种和质粒 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·主要药品及试剂 | 第32-35页 |
| ·方法 | 第35-41页 |
| ·目的片段的扩增、纯化与回收 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物回收(按TaKaRa 公司PCR 纯化试剂盒说明进行) | 第36页 |
| ·目的基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组ORF2 基因原核表达载体的构建 | 第39页 |
| ·重组融合蛋白PET-32a-ORF2 的诱导表达及检测 | 第39-40页 |
| ·PET-32a-ORF2 表达蛋白的纯化与复性 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-45页 |
| ·PCR 扩增ORF2 基因电泳结果 | 第41-42页 |
| ·pMD18-T-ORF2 重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒pET-32a-ORF2 的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET-32a-ORF2 在宿主菌中的诱导表达 | 第43页 |
| ·pET-32a-ORF2 表达产物western blot 鉴定 | 第43-44页 |
| ·pET-32a-ORF2 表达产物的纯化 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45页 |
| ·表达区域的选择 | 第45页 |
| ·PCV2 ORF2 的纯化及复性 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 猪圆环病毒间接ELISA 检测方法的建立 | 第46-53页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·ELISA 检测部分相关试剂的配制 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-48页 |
| ·抗原包被浓度及抗体稀释度的确定 | 第47页 |
| ·抗原包被条件的确定 | 第47页 |
| ·封闭液的确定 | 第47页 |
| ·酶标二抗稀释度的确定 | 第47-48页 |
| ·血清最佳作用时间的确定 | 第48页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第48页 |
| ·显色时间的确定 | 第48页 |
| ·重复性检验 | 第48页 |
| ·阻断试验 | 第48页 |
| ·符合率检验 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-52页 |
| ·抗原最适包被浓度和抗体最佳稀释度的确定 | 第48-49页 |
| ·酶标二抗工作浓度的确定 | 第49页 |
| ·血清及酶标二抗最佳反应时间的确定 | 第49-50页 |
| ·封闭液的确定 | 第50页 |
| ·包被条件的确定 | 第50页 |
| ·显色时间的确定 | 第50页 |
| ·重复性试验 | 第50-51页 |
| ·阻断试验结果 | 第51页 |
| ·符合率检验结果 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52页 |
| ·ELISA 工作条件的确定 | 第52页 |
| ·ELISA 方法的符合性、稳定性及特异性 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 CAP 蛋白多克隆抗体及单克隆抗体的制备 | 第53-59页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·试验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂及材料 | 第53页 |
| ·主要器材 | 第53-54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第54页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第54-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-57页 |
| ·PCV2 ORF2 多克隆抗体效价测定结果 | 第56-57页 |
| ·免疫小鼠的抗体测定结果 | 第57页 |
| ·细胞融合及阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·动物免疫与抗血清的制备 | 第57-58页 |
| ·抗体的检测 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
