| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-39页 |
| ·生物技术生产核黄素 | 第10-11页 |
| ·核黄素生物合成的分子机制 | 第11-14页 |
| ·枯草芽孢杆菌中核黄素的生物合成途径 | 第11-13页 |
| ·核黄素的生物合成基因及其编码的酶 | 第13-14页 |
| ·B.subtilis 中心代谢 | 第14-17页 |
| ·产核黄素枯草芽孢杆菌工程菌构建策略 | 第17-20页 |
| ·抗性突变株的选育 | 第17-19页 |
| ·代谢设计 | 第19页 |
| ·产核黄素枯草芽孢杆菌工程菌构建实例 | 第19-20页 |
| ·代谢工程 | 第20-36页 |
| ·代谢工程与系统生物学 | 第20-21页 |
| ·代谢通量分析 | 第21-25页 |
| ·代谢控制分析 | 第25-34页 |
| ·代谢工程在核黄素生产上的应用 | 第34-36页 |
| ·选题背景与研究思路 | 第36-39页 |
| ·选题背景 | 第36-37页 |
| ·技术路线与研究内容 | 第37-39页 |
| 第二章 通量平衡分析与目标靶点预测 | 第39-53页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·菌种 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·分批培养 | 第41-43页 |
| ·通量平衡分析 | 第43-47页 |
| ·核黄素比合成速率最大的通量平衡分析 | 第47-48页 |
| ·实验结果与讨论 | 第48-52页 |
| ·湿试验时枯草芽孢杆菌的代谢通量分析 | 第48-49页 |
| ·B.subtilis RH33::[pR863]_n理论最优通量 | 第49-51页 |
| ·实际通量与理论最优通量的对比-预测靶标 | 第51-52页 |
| 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 产核黄素枯草芽孢杆菌pta基因缺失及其缺陷株生长特性的研究 | 第53-69页 |
| ·实验材料 | 第54-60页 |
| ·菌种和质粒 | 第54-55页 |
| ·主要仪器 | 第55-56页 |
| ·主要试剂 | 第56-57页 |
| ·培养基 | 第57-58页 |
| ·主要溶液 | 第58-60页 |
| ·实验方法 | 第60-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-68页 |
| ·pta 基因的PCR 扩增 | 第64页 |
| ·pta 基因缺失载体的构建 | 第64-65页 |
| ·pta 基因缺失突变株构建 | 第65页 |
| ·pta 基因缺失菌株的生长及发酵特性研究 | 第65-68页 |
| 本章小结 | 第68-69页 |
| 第四章 枯草芽孢杆菌乙酰乳酸合成酶基因的克隆及表达 | 第69-85页 |
| ·实验材料 | 第69-71页 |
| ·菌种和质粒 | 第69-70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·培养基 | 第70-71页 |
| ·主要溶液 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-72页 |
| ·分批培养 | 第72-73页 |
| ·实验结果与讨论 | 第73-83页 |
| ·乙酰乳酸合成酶基因alsS 的PCR 扩增 | 第73-74页 |
| ·乙酰乳酸合成酶基因alsS 表达载体的构建 | 第74-77页 |
| ·含有pXly-alsS 融合片段的枯草芽孢杆菌的构建 | 第77-78页 |
| ·乙酰乳酸合成酶基因在枯草芽孢杆菌RHS 中的诱导表达 | 第78-80页 |
| ·pta 缺失菌中表达乙酰乳酸合成酶的研究 | 第80-81页 |
| ·pta 缺失菌中表达乙酰乳酸合成酶的代谢通量分析 | 第81-83页 |
| 本章小结 | 第83-85页 |
| 第五章 过量表达gdh基因对核黄素产量的影响 | 第85-96页 |
| ·实验材料 | 第86-87页 |
| ·菌种和质粒 | 第86页 |
| ·主要仪器 | 第86页 |
| ·主要试剂 | 第86页 |
| ·培养基 | 第86页 |
| ·主要溶液 | 第86-87页 |
| ·实验方法 | 第87-88页 |
| ·分批培养 | 第88页 |
| ·实验结果与讨论 | 第88-95页 |
| ·葡萄糖脱氢酶基因gdh 的PCR 扩增 | 第88-89页 |
| ·葡萄糖脱氢酶基因gdh 表达载体构建 | 第89-91页 |
| ·含有P43-gdh 融合片段的枯草芽孢杆菌的构建 | 第91-93页 |
| ·gdh 基因扩增对产核黄素工程菌核黄素生物合成的影响 | 第93-94页 |
| ·gdh 基因扩增对产核黄素工程菌代谢副产物形成的影响 | 第94-95页 |
| 本章小结 | 第95-96页 |
| 第六章 缺失pgi基因对核黄素产量的影响 | 第96-106页 |
| ·实验材料 | 第97-98页 |
| ·菌种和质粒 | 第97页 |
| ·主要仪器 | 第97页 |
| ·主要试剂 | 第97页 |
| ·培养基 | 第97页 |
| ·主要溶液 | 第97-98页 |
| ·实验方法 | 第98页 |
| ·分批培养 | 第98页 |
| ·实验结果与讨论 | 第98-105页 |
| ·磷酸葡萄糖异构酶基因pgi 的PCR 扩增 | 第98-99页 |
| ·磷酸葡萄糖异构酶基因pgi 缺失载体构建 | 第99-101页 |
| ·磷酸葡萄糖异构酶基因pgi 缺失菌株构建 | 第101-102页 |
| ·磷酸葡萄糖异构酶基因pgi 缺失菌株的生长及发酵特性研究 | 第102-104页 |
| ·酵母抽提物对磷酸葡萄糖异构酶基因pgi 缺失菌株的生长及核黄素积累的影响 | 第104-105页 |
| 本章小结 | 第105-106页 |
| 第七章 产核黄素枯草芽孢杆菌6-磷酸葡萄糖分支点的通量控制分析 | 第106-114页 |
| ·实验材料 | 第106-107页 |
| ·菌种和质粒 | 第106-107页 |
| ·主要仪器 | 第107页 |
| ·主要试剂 | 第107页 |
| ·培养基 | 第107页 |
| ·实验方法 | 第107-108页 |
| ·通量控制分析 | 第108-111页 |
| ·实验结果与分析 | 第111-113页 |
| ·代谢分支点弹性系数的确定 | 第111-112页 |
| ·代谢分支点通量控制系数计算和分析 | 第112-113页 |
| 本章小结 | 第113-114页 |
| 第八章 结论与展望 | 第114-117页 |
| ·结论和创新点 | 第114-115页 |
| ·展望 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-131页 |
| 附录 | 第131-140页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
