| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 前言 | 第11-26页 |
| 1 概述 | 第11-15页 |
| ·食品安全 | 第11-12页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第12-13页 |
| ·本文所涉及的肠道致病菌及其危害 | 第13-15页 |
| 2 肠道致病菌快速检测方法 | 第15-19页 |
| ·免疫学技术 | 第16-17页 |
| ·代谢学技术 | 第17-18页 |
| ·分子生物学技术 | 第18-19页 |
| 3 本研究所采用的检测方法 | 第19-26页 |
| ·多重 PCR | 第19-20页 |
| ·TaqMan荧光定量 PCR | 第20-23页 |
| ·本研究所采用方法的优越性 | 第23-24页 |
| ·本研究的主要内容及其创新 | 第24-26页 |
| 第一章 肠道致病菌的培养、分离及鉴定 | 第26-44页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-43页 |
| ·沙门氏菌的培养、分离和鉴定 | 第27-34页 |
| ·志贺氏菌的培养、分离和鉴定 | 第34-37页 |
| ·产毒素大肠埃希氏菌的培养、分离和鉴定 | 第37-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 第二章 肠道致病菌的多重 PCR快速检测体系的研究 | 第44-58页 |
| 1 材料 | 第44-46页 |
| 2 方法 | 第46-51页 |
| ·DNA的提取 | 第46页 |
| ·目的基因的选择和引物的设计 | 第46-48页 |
| ·阳性对照模板的制备 | 第48-51页 |
| ·多重 PCR扩增条件的优化 | 第51页 |
| ·多重 PCR体系的特异性、灵敏度、样品检测 | 第51页 |
| ·PCR试剂盒组成 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-56页 |
| ·DNA模板的提取方法的比较 | 第51页 |
| ·各目的片段序列 | 第51-53页 |
| ·单独 PCR反应体系及结果 | 第53-54页 |
| ·多重 PCR反应体系的优化结果 | 第54页 |
| ·多重 PCR反应的特异性 | 第54页 |
| ·多重 PCR反应的灵敏度 | 第54-55页 |
| ·牛肉中志贺菌的检测 | 第55-56页 |
| ·试剂盒稳定性和重复性 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 实时荧光定量 PCR快速检测大肠埃希氏菌的研究 | 第58-74页 |
| 1 材料 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-61页 |
| ·活菌记数 | 第58页 |
| ·模板的提取 | 第58页 |
| ·实时荧光 PCR 引物和 Taqman探针设计 | 第58-60页 |
| ·普通 PCR扩增条件的优化 | 第60页 |
| ·实时荧光定量PCR标准品的制备 | 第60页 |
| ·实时荧光定量 PCR反应系统的优化 | 第60页 |
| ·实时荧光 PCR反应系统线性标准曲线绘制 | 第60页 |
| ·实时荧光 PCR定量反应系统特异性及敏感性检测 | 第60-61页 |
| ·参比方法 | 第61页 |
| ·荧光定量 PCR检测试剂盒的组装 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-71页 |
| ·普通 PCR扩增条件优化结果 | 第61-62页 |
| ·实时荧光定量 PCR反应系统扩增及相关参数确定 | 第62-64页 |
| ·实时荧光定量 PCR反应标准曲线的建立 | 第64-65页 |
| ·实时荧光定量 PCR反应稳定性和重复性试验 | 第65-69页 |
| ·荧光定量 PCR反应特异性和灵敏度检测 | 第69-70页 |
| ·荧光定量 PCR反应系统线性检测范围 | 第70页 |
| ·样品的检测结果 | 第70页 |
| ·荧光定量 PCR检测试剂盒的组装 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 英文缩写表 | 第80-81页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |