| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 符号与缩略语说明 | 第18-19页 |
| 文献综述 | 第19-68页 |
| 第一章 土壤农药污染及其生物修复 | 第19-59页 |
| 1.土壤农药污染现状 | 第19-20页 |
| 2 有机农药在土壤中的环境行为与降解机理 | 第20-29页 |
| ·扩散作用 | 第20-21页 |
| ·土壤吸附作用 | 第21-24页 |
| ·挥发作用 | 第24-25页 |
| ·水解作用 | 第25-26页 |
| ·环境光化学行为 | 第26-27页 |
| ·生物降解 | 第27-29页 |
| 3 农药对生物的影响 | 第29-32页 |
| 4 生物修复 | 第32-39页 |
| ·生物修复的定义和分类 | 第32-35页 |
| ·原位生物修复 | 第33-34页 |
| ·异位生物修复 | 第34-35页 |
| ·外源微生物引入的条件与原则 | 第35-36页 |
| ·微生物修复的作用机制 | 第36-39页 |
| ·矿化作用 | 第37页 |
| ·共代谢作用 | 第37-38页 |
| ·间接作用 | 第38页 |
| ·参与微生物降解作用的生物化学过程 | 第38-39页 |
| 5 微生物修复的影响因素 | 第39-42页 |
| ·物理化学因素 | 第39-40页 |
| ·生物化学因素 | 第40-42页 |
| 6 生物修复过程的生态毒理诊断 | 第42-43页 |
| 7 久效磷的生物降解 | 第43-46页 |
| ·生物转化 | 第43-44页 |
| ·微生物降解 | 第44页 |
| ·久效磷的降解途径 | 第44-45页 |
| ·久效磷降解酶 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-59页 |
| 第二章 降解基因克隆方法概述 | 第59-68页 |
| 1.保守基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·引物扩增法 | 第59页 |
| ·探针克隆法 | 第59-60页 |
| 2.新基因的克隆方法 | 第60-66页 |
| ·功能克隆 | 第60-61页 |
| ·鸟枪法 | 第60-61页 |
| ·从蛋白质出发克隆 | 第61页 |
| ·定位克隆 | 第61-64页 |
| ·降解性质粒 | 第61-62页 |
| ·转座子标签法 | 第62页 |
| ·互补文库 | 第62-63页 |
| ·随机引物克隆法 | 第63-64页 |
| ·宏基因组 | 第64-66页 |
| ·基于基因序列信息的筛选 | 第65页 |
| ·基于功能表达的筛选 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 实验部分 | 第68-134页 |
| 第一章 久效磷降解菌M-1的分离、筛选与鉴定 | 第68-82页 |
| 1 材料与方法 | 第68-72页 |
| ·供试材料 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·供试农药及试剂 | 第68页 |
| ·供试菌株 | 第68页 |
| ·试验方法 | 第68-72页 |
| ·菌株的富集和分离 | 第68-69页 |
| ·生理生化反应 | 第69页 |
| ·降解菌株总DNA的提取 | 第69页 |
| ·降解菌株16S rDNA的PCR扩增 | 第69页 |
| ·PCR产物的T/A克隆 | 第69页 |
| ·高效感受态细胞的制备和转化 | 第69-70页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第70页 |
| ·16S rDNA序列测定 | 第70页 |
| ·系统发育分析 | 第70页 |
| ·DNA-DNA同源性测定 | 第70-71页 |
| ·DNA样品的剪切 | 第70-71页 |
| ·DNA-DNA同源性测定 | 第71页 |
| ·菌体生长量的测定 | 第71页 |
| ·久效磷含量的检测 | 第71-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-80页 |
| ·样品的富集培养及菌种分离纯化 | 第72-73页 |
| ·M-1的菌落形态及生理生化特征 | 第73-75页 |
| ·M-1系统发育分析 | 第75-76页 |
| ·DNA-DNA同源性分析 | 第76-77页 |
| ·环境条件对M-1生长的影响 | 第77-79页 |
| ·温度对M-1生长的影响 | 第77页 |
| ·pH对M-1生长的影响 | 第77-78页 |
| ·NaCl浓度对M-1生长的影响 | 第78页 |
| ·M-1对抗生素的耐受性 | 第78-79页 |
| ·M-1质粒提取 | 第79-80页 |
| 3 结论 | 第80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 第二章 久效磷降解菌株M-1降解特性研究 | 第82-93页 |
| 1 材料与方法 | 第82-84页 |
| ·供试菌株 | 第82页 |
| ·培养基与试剂 | 第82页 |
| ·菌株的培养及菌悬液的制备 | 第82页 |
| ·培养条件对菌株生长和久效磷降解的影响 | 第82-83页 |
| ·久效磷浓度对M-1生长的影响 | 第82-83页 |
| ·环境因素对M-1生长和久效磷降解的影响 | 第83页 |
| ·M-1对久效磷的降解试验 | 第83页 |
| ·降解谱试验 | 第83页 |
| ·磷酸酯酶的检测及测定 | 第83-84页 |
| ·分析方法 | 第84页 |
| 2.结果与分析 | 第84-90页 |
| ·久效磷浓度对M-1生长的影响 | 第84-85页 |
| ·环境因素对M-1生长以及久效磷降解的影响 | 第85-87页 |
| ·M-1对久效磷的降解 | 第87-89页 |
| ·M-1对其他有机磷农药的降解 | 第89页 |
| ·M-1磷酸酯酶活性的检测 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| 本章小节 | 第91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 第三章 久效磷污染土壤的生物修复研究 | 第93-99页 |
| 1 材料与方法 | 第93-94页 |
| ·菌种、培养基与试剂 | 第93页 |
| ·菌株的培养及菌悬液的制备 | 第93页 |
| ·久效磷在不同土壤降解试验 | 第93-94页 |
| ·土壤水分含量对久效磷降解的影响 | 第94页 |
| ·土壤久效磷的提取与测定 | 第94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-97页 |
| ·M-1对不同土壤类型久效磷农药污染的生物修复效果 | 第94-96页 |
| ·土壤水分含量对久效磷降解的影响 | 第96-97页 |
| 3 结论与讨论 | 第97页 |
| 参考文献 | 第97-99页 |
| 第四章 Paracoccus versutus.M-1降解酰胺类除草剂特性分析 | 第99-110页 |
| 1 材料与方法 | 第99-101页 |
| ·菌株 | 第99页 |
| ·培养基 | 第99页 |
| ·供试农药及试剂 | 第99页 |
| ·菌株培养及菌悬液的制备 | 第99页 |
| ·培养条件对菌株生长和敌稗降解的影响 | 第99-100页 |
| ·M-1对酰胺类除草剂的降解试验 | 第100页 |
| ·粗酶液的制备 | 第100页 |
| ·酰胺类除草剂降解酶活力测定 | 第100页 |
| ·敌稗在土壤中的降解试验 | 第100-101页 |
| 2.结果与分析 | 第101-106页 |
| ·培养条件对M-1生长和敌稗降解的影响 | 第101-102页 |
| ·M-1对酰胺类除草剂的降解 | 第102-103页 |
| ·M-1降解酰胺类除草剂代谢途径分析 | 第103-105页 |
| ·酰胺酶活性分析 | 第105-106页 |
| ·敌稗在潮土中的降解 | 第106页 |
| 3 讨论 | 第106-107页 |
| 本章小结 | 第107页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 第五章 久效磷降解菌M-1酶学特性的初步研究 | 第110-118页 |
| 1 材料与方法 | 第110-111页 |
| ·供试菌株、培养基及试剂 | 第110页 |
| ·菌株培养 | 第110页 |
| ·粗酶液的制备 | 第110页 |
| ·久效磷浓度的测定 | 第110-111页 |
| ·碳、氮源对M-1生长和产酶的影响 | 第111页 |
| ·pH、温度对久效磷降解酶活性的影响 | 第111页 |
| ·pH、温度对久效磷降解酶稳定性的影响 | 第111页 |
| 2 结果与分析 | 第111-116页 |
| ·M-1降解久效磷效果的测定 | 第111-112页 |
| ·久效磷降解酶的定域实验 | 第112页 |
| ·碳、氮源对M-1生长和产酶的影响 | 第112-113页 |
| ·pH、温度对久效磷降解酶活性的影响 | 第113-114页 |
| ·pH、温度对久效磷降解酶稳定性的影响 | 第114-115页 |
| ·粗酶液的米式常数(Km)和最大反应速率(Vmax) | 第115-116页 |
| 3 讨论 | 第116页 |
| 本章小结 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-118页 |
| 第六章 久效磷降解相关基因的克隆 | 第118-134页 |
| 1 材料与方法 | 第118-126页 |
| ·培养基与试剂 | 第118页 |
| ·菌株与质粒 | 第118-119页 |
| ·质粒消除试验 | 第119-120页 |
| ·菌体基因组DNA的提取 | 第120页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第120页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第120页 |
| ·高效感受态细胞的制备和转化 | 第120页 |
| ·转座子的导入 | 第120-121页 |
| ·久效磷含量的检测 | 第121页 |
| ·PCR法验证突变子基因组中的转座子片段 | 第121-122页 |
| ·突变菌株的验证 | 第122页 |
| ·久效磷降解基因的克隆 | 第122-126页 |
| ·SEFA-PCR扩增原理与示意图 | 第122-124页 |
| ·序列测定 | 第124-125页 |
| ·目标片段的扩增 | 第125页 |
| ·突变子降解功能的回复试验 | 第125-126页 |
| 2 结果与分析 | 第126-131页 |
| ·M-1质粒消除 | 第126-127页 |
| ·突变子的筛选与鉴定 | 第127页 |
| ·突变子中插入片段的PCR验证 | 第127-128页 |
| ·突变子中转座子侧翼序列的克隆 | 第128-129页 |
| ·序列分析 | 第129-130页 |
| ·功能验证 | 第130-131页 |
| 3 结论与讨论: | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-134页 |
| 全文总结 | 第134-135页 |
| 本论文研究的主要创新点 | 第135-136页 |
| 附录一 培养基及试剂配方 | 第136-138页 |
| 附录二 研究中获得的相关DNA序列 | 第138-143页 |
| 附录三 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
