| 缩略词 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-48页 |
| 第一节 耐辐射球菌极端抗性的研究进展 | 第18-28页 |
| ·耐辐射球菌的形态学特征 | 第18-19页 |
| ·耐辐射球菌的结构研究进展 | 第19-20页 |
| ·分子防御机制研究进展 | 第20-21页 |
| ·重要修复基因的研究进展 | 第21-25页 |
| ·基因组学的研究进展 | 第25-26页 |
| ·蛋白质组学的研究进展 | 第26-27页 |
| ·比较基因组学研究耐辐射球菌DNA损伤修复机制 | 第27页 |
| ·小结与展望 | 第27-28页 |
| 第二节 解旋酶RecQ在维持基因组稳定性中的研究进展 | 第28-48页 |
| ·RecQ解旋酶的分类和命名 | 第28-29页 |
| ·RecQ解螺旋酶的结构特征和生化特性 | 第29-30页 |
| ·原核生物,以E.coli为例介绍RecQ解旋酶作用 | 第30-32页 |
| ·真核生物,以酵母为例介绍RecQ解旋酶作用机制 | 第32-33页 |
| ·RecQ解螺旋酶在人类疾病方面的研究综述 | 第33-39页 |
| ·小结 | 第39页 |
| ·关于耐辐射球菌RecQ的几点思考 | 第39-48页 |
| 第二章 耐辐射球菌recQ基因基于生物信息学方法的分析 | 第48-63页 |
| 1.引言 | 第48页 |
| 2.材料与方法 | 第48-49页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·方法 | 第49页 |
| 3.结果与分析 | 第49-57页 |
| ·DR1289基因位置,核苷酸序列及氨基酸序列 | 第49-53页 |
| ·DR1289的motif在线分析 | 第53页 |
| ·DR2444基因位置,核苷酸序列及氨基酸序列 | 第53-56页 |
| ·DR2444 Motif在线分析 | 第56-57页 |
| ·DR1289各个结构域的同源性分析 | 第57页 |
| ·耐辐射球菌recQ同源物进化树分析 | 第57页 |
| 4.讨论 | 第57-60页 |
| 5.小结 | 第60-61页 |
| 6.参考文献 | 第61-63页 |
| 第三章 耐辐射球菌recQ双突变株构建 | 第63-73页 |
| 1.引言 | 第63-64页 |
| 2.材料与方法 | 第64-66页 |
| ·菌株和试剂 | 第64页 |
| ·突变株的构建和转化 | 第64-65页 |
| ·突变株的鉴定 | 第65-66页 |
| ·辐射条件下突变株的生存率测定 | 第66页 |
| ·H_2O_2氧化压力下突变株的生存率测定 | 第66页 |
| 3.结果和分析 | 第66-70页 |
| ·RecQ双突变株的构建 | 第66-67页 |
| ·RecQ双突变株的鉴定 | 第67-69页 |
| ·辐射条件下突变株存活率的测定 | 第69-70页 |
| ·突变株的H_2O_2生存率 | 第70页 |
| 4.讨论 | 第70-71页 |
| 5.小结 | 第71页 |
| 6.参考文献 | 第71-73页 |
| 第四章 RecQ突变体特性及功能补偿活性分析 | 第73-88页 |
| 1.引言 | 第73页 |
| 2.材料与方法 | 第73-78页 |
| ·菌株与质粒 | 第73-74页 |
| ·生长曲线 | 第74页 |
| ·耐辐射球菌脉冲场电泳基因组制备流程 | 第74-75页 |
| ·耐辐射球菌脉冲场电泳(PFGE)流程 | 第75-76页 |
| ·补偿质粒及菌株的构建 | 第76页 |
| ·MQ和MQ1-5的表型分析 | 第76-77页 |
| ·DR1289蛋白兔多克隆抗血清的制备 | 第77页 |
| ·Western blot印迹实验 | 第77-78页 |
| ·主要仪器 | 第78页 |
| 3.结果与分析 | 第78-84页 |
| ·RecQ突变株对各种逆境的生存率曲线分析 | 第78页 |
| ·RecQ突变株生长较为缓慢 | 第78-81页 |
| ·脉冲场电泳分析表明ΔDR1289具有基因组的不稳定性 | 第81页 |
| ·补偿质粒可在体内稳定表达各个结构域 | 第81-84页 |
| ·功能补偿实验表明三个HRDC结构域都贡献于极端抗性 | 第84页 |
| 4.讨论 | 第84-85页 |
| 5.小结 | 第85页 |
| 6.参考文献 | 第85-88页 |
| 第五章 耐辐射球菌RecQ蛋白的体外活性研究 | 第88-111页 |
| 1.引言 | 第88-90页 |
| 2.材料与方法 | 第90-95页 |
| ·菌株与质粒 | 第90页 |
| ·实验材料与试剂 | 第90-91页 |
| ·菌株培养 | 第91页 |
| ·DR1289蛋白表达质粒和突变蛋白表达质粒的构建 | 第91-92页 |
| ·DR1289蛋白和突变蛋白的表达 | 第92页 |
| ·DR1289蛋白和突变蛋白的纯化 | 第92-93页 |
| ·解螺旋酶(Helicase)活性测试 | 第93-95页 |
| ·ATPase活性测试实验 | 第95页 |
| ·仪器与设备 | 第95页 |
| 3.结果与分析 | 第95-102页 |
| ·DR1289蛋白表达质粒的构建及蛋白纯化 | 第95-97页 |
| ·DR1289解螺旋酶活性 | 第97-100页 |
| ·HRDC结构域截短后对DR1289突变蛋白的效应 | 第100页 |
| ·D.radiodurans SSB蛋白对DR1289解螺旋酶活性的效应 | 第100-102页 |
| ·HRDC结构域能够提高DR1289的ATPase酶活性 | 第102页 |
| 4.讨论 | 第102-107页 |
| 5.小结 | 第107页 |
| 6.参考文献 | 第107-111页 |
| 第六章 耐辐射球菌recQ突变体基因表达谱差异分析 | 第111-143页 |
| 1.引言 | 第111-112页 |
| 2.材料与方法 | 第112-121页 |
| ·芯片的设计与制备 | 第112-113页 |
| ·RNA的提取和纯化 | 第113-114页 |
| ·芯片杂交流程 | 第114-117页 |
| ·芯片所需试剂及保存条件 | 第117-119页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第119-120页 |
| ·Western Blot分析RecA的表达 | 第120页 |
| ·细胞体内全Fe和全Mn浓度的测定 | 第120-121页 |
| ·电子顺磁共振测定细胞内自由铁 | 第121页 |
| 3.结果与分析 | 第121-136页 |
| ·ΔDR1289突变体转录谱水平分析 | 第121-126页 |
| ·氧化压力下ΔDR1289突变株与R1转录谱水平比较 | 第126-131页 |
| ·荧光定量PCR验证芯片数据 | 第131-134页 |
| ·ΔDR1289突变体RecA蛋白的Western Blot分析 | 第134页 |
| ·ΔDR1289突变体内Mn/Fe和自由铁含量变化 | 第134-136页 |
| 4.讨论 | 第136-139页 |
| 5.小结 | 第139-140页 |
| 6.参考文献 | 第140-143页 |
| 第七章 耐辐射球菌recQ突变株蛋白谱表达差异 | 第143-159页 |
| 1.引言 | 第143-146页 |
| 2.材料与方法 | 第146-151页 |
| ·仪器与试剂 | 第146页 |
| ·样品制备与试剂准备 | 第146-147页 |
| ·细胞样品的裂解处理步骤 | 第147页 |
| ·蛋白质的二维液相色谱分离 | 第147-151页 |
| ·蛋白质组图谱分析软件 | 第151页 |
| 3.结果与分析 | 第151-154页 |
| ·耐辐射球菌各样品的第1维图谱差异 | 第151-153页 |
| ·耐辐射球菌各样品的第2维图谱差异 | 第153-154页 |
| 4.讨论 | 第154-156页 |
| 5.小结 | 第156-157页 |
| 6.参考文献 | 第157-159页 |
| 结论 | 第159-161页 |
| 博士期间发表论文(含待发表) | 第161-162页 |
| 致谢 | 第162页 |
