| 摘要 | 第1-10页 |
| 关键词 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-33页 |
| ·纤维素生物合成研究进展 | 第15-17页 |
| ·纤维素的结构及其作用 | 第15页 |
| ·纤维素体外合成的研究概况 | 第15-16页 |
| ·植物纤维素生物合成途径研究进展 | 第16-17页 |
| ·植物纤维素合成酶基因研究进展 | 第17-29页 |
| ·植物纤维素合成酶基因的发现 | 第17-18页 |
| ·纤维素合成酶的超家族(supper-family) | 第18-22页 |
| ·植物纤维素合成酶的基因结构 | 第18-20页 |
| ·纤维素合成酶相似蛋 | 第20-21页 |
| ·CesA 与Csl 蛋白的超家族 | 第21-22页 |
| ·植物纤维素合成酶的表达规律 | 第22-23页 |
| ·与纤维素生物合成的关系 | 第23-24页 |
| ·纤维素的生物合成需要多个纤维素合成酶基因的共同参与 | 第24-27页 |
| ·纤维素合成酶功能的研究方法 | 第27-28页 |
| ·参与纤维素生物合成的其它基因 | 第28-29页 |
| ·微纤丝排布与纤维素合成酶基因的关系 | 第29页 |
| ·林木纤维素合成酶基因研究进展 | 第29-30页 |
| ·问题与展望 | 第30-31页 |
| ·本研究拟解决的问题 | 第31-33页 |
| 2 毛白杨纤维素合成酶基因(PtoCesA1)基因组DNA 片段的克隆与鉴定 | 第33-40页 |
| ·实验材料与试剂 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·仪器与试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·毛白杨幼叶 DNA 的提取 | 第34页 |
| ·PtoCesA1 基因组DNA 片段的PCR 扩增 | 第34-35页 |
| ·目的扩增片段的回收 | 第35页 |
| ·目的片段连接转化测序 | 第35-36页 |
| ·测序结果的分析方法 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 3 毛白杨纤维素合成酶基因(PtoCesA1)的cDNA 克隆与鉴定 | 第40-53页 |
| ·材料与方法 | 第40-46页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·仪器与试剂 | 第40-41页 |
| ·研究方法与步骤 | 第41-46页 |
| ·毛白杨次生木质部组织RNA 的提取 | 第41页 |
| ·毛白杨双链cDNA 的合成 | 第41-43页 |
| ·PCR 扩增PtoCesA1 基因 | 第43页 |
| ·目的DNA 片段的回收 | 第43-44页 |
| ·目的DNA 片段与pGEM-T Easy 载体的连接 | 第44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44-45页 |
| ·白斑PCR 筛选 | 第45页 |
| ·质粒DNA 的快速提取-----Clark M.S 等(1998)方法 | 第45-46页 |
| ·测序及序列分析方法 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·毛白杨双链cDNA 的合成 | 第46-47页 |
| ·毛白杨PtoCesA1 基因的cDNA 克隆 | 第47-52页 |
| ·讨论 | 第52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 4 PtoCesA1 反义表达载体的构建及遗传转化 | 第53-75页 |
| ·材料与方法 | 第53-60页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·菌株和载体 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-60页 |
| ·不同PtoCesA1 基因片段的扩增和鉴定 | 第53-55页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·表达载体向农杆菌的转化 | 第56页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化和转基因植株再生 | 第56-57页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第57-59页 |
| ·转基因烟草的表型测定 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-70页 |
| ·PtoCesA1 反义表达载体的构建策略及酶切鉴定 | 第60-62页 |
| ·反义转基因烟草和杨树的检测 | 第62-65页 |
| ·PCR 分子检测 | 第62-64页 |
| ·Southern 杂交鉴定 | 第64-65页 |
| ·反义PtoCesA1 转烟草的表型 | 第65-70页 |
| ·反义转烟草的基本形态指标 | 第65-67页 |
| ·反义转基因烟草的次生木质部结构 | 第67-68页 |
| ·反义转基因烟草茎部组织纤维细胞的形态特征 | 第68-69页 |
| ·反义转基因烟草的茎部纤维细胞壁的厚度 | 第69-70页 |
| ·PtoCesA1 反义烟草的纤维素含量和木质素含量 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| ·表达载体的遗传转化和转基因植株再生 | 第70-71页 |
| ·PtoCeaA1 反义烟草的特征与功能分析 | 第71-72页 |
| ·不同部位的PtoCesA1 基因片段构建的反义表达载体抑制效率. | 第72-73页 |
| ·同一基因的不同长度基因片段构建的反义表达载体对转基因烟草特征的影响不显著 | 第73页 |
| ·为林木的纤维素合成酶基因的功能及相互作用机制提供了一个新的平台 | 第73页 |
| ·小结 | 第73-75页 |
| 5 毛白杨PtoCesA1 基因正义表达载体的构建与遗传转化 | 第75-88页 |
| ·材料与方法 | 第75-77页 |
| ·材料与试剂 | 第75页 |
| ·菌株和载体 | 第75页 |
| ·试剂 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-77页 |
| ·正义表达载体的构建步骤 | 第75-77页 |
| ·质粒pBIPA1 转化农杆菌与遗传转化 | 第77页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第77页 |
| ·转基因阳性烟草的表型测定 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-85页 |
| ·PtoCesA1 基因正义植物表达载体的构建 | 第77-79页 |
| ·重组质粒pBIPA1 的PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第79-81页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第81-82页 |
| ·PCR 分子检测结果 | 第81-82页 |
| ·Southern 杂交结果 | 第82页 |
| ·pBIPA1 转基因烟草的特征 | 第82-85页 |
| ·pBIPA1 转基因烟草的形态指标 | 第82-84页 |
| ·pBIPA1 转基因烟草纤维细胞的长度、宽度和细胞壁厚度 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 6 PtoCesA2,ptoCesA3 反义表达载体的构建及遗传转化 | 第88-106页 |
| ·材料与方法 | 第88-92页 |
| ·材料与试剂 | 第88页 |
| ·实验材料 | 第88页 |
| ·试剂 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-92页 |
| ·引物设计 | 第88页 |
| ·基因的克隆与测序鉴定 | 第88-89页 |
| ·pBIPA2,pBIPA3 反义表达载体的构建 | 第89页 |
| ·pBIPA2+PA3 表达载体的构建及遗传转化 | 第89-91页 |
| ·农杆菌转化 | 第91页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化和转基因植株再生 | 第91-92页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第92页 |
| ·转基因烟草的表型特征测定 | 第92页 |
| ·结果与分析 | 第92-102页 |
| ·PtoCesA2,PtoCesA3 基因片段的克隆与鉴定 | 第92-94页 |
| ·PtoCesA2,PtoCesA3 基因反义表达载体的构建 | 第94-95页 |
| ·pBIPA2+PA3 反义表达载体的构建 | 第95页 |
| ·pBIPA2,pBIPA3,pBIPA2+PA3 基因植株的分子检测 | 第95-97页 |
| ·PCR 检测结果 | 第95-97页 |
| ·Southern 杂交结果 | 第97页 |
| ·pBIPA2,pBIPA3,pBIPA2+PA3 转基因烟草的表型 | 第97-102页 |
| ·pBIPA2,pBIPA3,pBIPA2+PA3 转基因烟草的形态指标. | 第97-99页 |
| ·转基因烟草的次生木质部结构 | 第99-101页 |
| ·转基因烟草纤维细胞的长度和宽度 | 第101-102页 |
| ·转基因烟草的纤维细胞壁厚度 | 第102页 |
| ·讨论 | 第102-105页 |
| ·PtoCeaA2 反义转基因烟草的表型与功能分析 | 第102-103页 |
| ·PtoCesA3 反义转基因烟草的表型与功能分析 | 第103-104页 |
| ·PtoCesA1,PtoCesA2,PtoCesA3 反义转基因烟草的表型与相互作用机制分析 | 第104-105页 |
| ·本章小结 | 第105-106页 |
| 7 结论 | 第106-109页 |
| ·PtoCesA1 全长基因的克隆与功能分析 | 第106页 |
| ·PtoCesA2,PtoCesA3 基因片段的克隆与功能分析 | 第106-107页 |
| ·PtoCesA1,PtoCesA2 和PtoCesA3 的相互作用机制的分析 | 第107-108页 |
| ·林木纤维素合成酶基因功能的研究平台的建立 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-119页 |
| 附录1 转基因杨树植株 | 第119-120页 |
| 附录2 图表目录 | 第120-122页 |
| 附录3 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
