| 1 前言 | 第1-18页 |
| ·RNA干扰技术及其应用 | 第8-11页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第8-9页 |
| ·RNA干扰的机制 | 第9-10页 |
| ·RNA干扰的应用 | 第10-11页 |
| ·研究基因功能的新工具 | 第10页 |
| ·疾病的治疗 | 第10-11页 |
| ·RDE-4的研究进展 | 第11-12页 |
| ·RDE-1、RDE-4的发现 | 第11-12页 |
| ·RDE-1、RDE-4在RNA干扰中的作用 | 第12页 |
| ·原核表达体系的研究和应用 | 第12-14页 |
| ·概述 | 第12-13页 |
| ·pET表达系统 | 第13-14页 |
| ·蛋白纯化 | 第14-16页 |
| ·蛋白结晶 | 第16页 |
| ·RDE-4的研究意义、内容及技术路线 | 第16-18页 |
| ·本研究的技术路线 | 第17页 |
| ·具体的研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-27页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·菌种与质粒 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-27页 |
| ·基因克隆、亚克隆 | 第18-22页 |
| ·RDE-4的引物设计 | 第18-19页 |
| ·PCR扩增反应及其酶切回收 | 第19-20页 |
| ·pET-21b(+)、pGEX-1酶切及大片段回收 | 第20页 |
| ·连接反应及转化 | 第20-21页 |
| ·重组子鉴定 | 第21-22页 |
| ·基因表达和蛋白纯化 | 第22-27页 |
| ·基因表达检测 | 第22页 |
| ·可溶性测试 | 第22-23页 |
| ·蛋白纯化 | 第23-24页 |
| ·目的蛋白酶切分析 | 第24-26页 |
| ·PPase柱消化RDE-4(1-280Aa)蛋白 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE | 第26页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第26-27页 |
| ·蛋白质晶体 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-36页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组子的测序鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组子的表达鉴定 | 第29-31页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第30-31页 |
| ·可溶性分析 | 第31页 |
| ·目的蛋白的大量纯化及分析鉴定 | 第31-33页 |
| ·蛋白酶切分析 | 第33-34页 |
| ·PPase柱上消化RDE-4(1-280Aa) | 第34-35页 |
| ·蛋白质晶体 | 第35-36页 |
| 4 结论 | 第36-37页 |
| 5 讨论 | 第37-42页 |
| ·蛋白纯化的影响因素 | 第37-39页 |
| ·蛋白质性质 | 第37-38页 |
| ·分离方法 | 第38-39页 |
| ·不溶性蛋白的处理 | 第39-40页 |
| ·外源基因表达的影响因素 | 第40-42页 |
| ·表达载体 | 第40-41页 |
| ·宿主菌 | 第41页 |
| ·培养条件 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50页 |