基因芯片技术在百合病毒检测中的应用
| 1 引言 | 第1-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-25页 |
| 2．1 材料 | 第14-16页 |
| 2．1．1 病毒来源 | 第14页 |
| 2．1．2 主要仪器和设备 | 第14-15页 |
| 2．1．3 试验所需试剂和培养基 | 第15-16页 |
| 2．2 方法 | 第16-25页 |
| 2．2．1 引物设计 | 第16-17页 |
| 2．2．2 探针设计 | 第17-18页 |
| 2．2．3 寡核苷酸引物、探针的合成 | 第18页 |
| 2．2．4 寡核苷酸含量测定 | 第18页 |
| 2．2．5 植物总 RNA的提取 | 第18页 |
| 2．2．6 RT-PCR反应 | 第18-20页 |
| 2．2．7 PCR扩增效率的确定 | 第20页 |
| 2．2．8 PCR产物测序鉴定 | 第20页 |
| 2．2．9 病毒特异基因阳性质粒的构建 | 第20-23页 |
| 2．2．10 寡核苷酸芯片的制备 | 第23页 |
| 2．2．11 芯片的杂交与洗涤 | 第23-24页 |
| 2．2．12 芯片的扫描与信号检测 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-49页 |
| 3．1 病毒 CP基因的 PCR检测及鉴定 | 第25-27页 |
| 3．1．1 RNA提取结果 | 第25页 |
| 3．1．2 RT-PCR扩增结果 | 第25-26页 |
| 3．1．3 病毒核酸的测序结果 | 第26-27页 |
| 3．2 寡核苷酸芯片的制备 | 第27-36页 |
| 3．2．1 荧光不对称 RT-PCR扩增结果 | 第28-29页 |
| 3．2．2 病毒基因探针特异性 | 第29-34页 |
| 3．2．3 病毒基因芯片的灵敏度 | 第34-36页 |
| 3．3 杂交反应体系的优化 | 第36-42页 |
| 3．3．1 PCR产物进行变性与未变性处理 | 第36-37页 |
| 3．3．2 上下游引物比例 | 第37-38页 |
| 3．3．3 杂交时间 | 第38-39页 |
| 3．3．4 杂交温度 | 第39-40页 |
| 3．3．5 杂交液成分 | 第40-42页 |
| 3．4 寡核苷酸芯片对植物病毒的检测 | 第42-49页 |
| 3．4．1 阳性标本检测 | 第42-43页 |
| 3．4．2 百合田间标本检测 | 第43-45页 |
| 3．4．3 饲毒蚜虫的 RT-PCR检测结果 | 第45-47页 |
| 3．4．4 芯片的特异性 | 第47-48页 |
| 3．4．5 芯片的稳定性 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-54页 |
| 4．1 病毒基因探针的特异性问题 | 第49-50页 |
| 4．2 基因芯片检测技术的整体性评价 | 第50-53页 |
| 4．3 问题与展望 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-72页 |
