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SARS-CoV N蛋白功能的分子机制和作为抗原在SARS诊断上的应用

Abstract第1-10页
摘要第10-13页
Table of Contents第13-15页
1 Introduction第15-44页
   ·SARS epidemiology and etiology第15-17页
   ·Origin of SARS virus第17-18页
   ·SARS-CoV genome structure第18-22页
   ·SARS-CoV structural proteins第22-24页
   ·SARS-CoV nucleocapsid protein第24-26页
   ·The first research objective: SARS-CoV N protein used for serodiagnosis第26-28页
   ·The second research objective: sub-cellular localization properties of SARS-CoVN protein第28-38页
   ·The third research objective: investigate the possible role of N protein in signal transduction pathway第38-44页
2 Materials and method第44-56页
   ·Clinical Samples第44页
   ·Cells culture第44-45页
   ·Virus infection and isolation of viral RNA第45页
   ·Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)第45-46页
   ·Sequence analysis of SARS-CoV N protein gene第46页
   ·Plasmids construction第46-49页
   ·Prokaryotic expression and purification of SARS-CoV N protein第49-50页
   ·Preparing microplates for Enzyme-Linked Immunosorbent Assay第50-51页
   ·Generation of anti-N polyclonal antibody in rabbit第51页
   ·Cell transfection第51-52页
   ·Establishments of stable nucleocapsid protein-expressing Vero E6 cell line第52页
   ·Western blotting第52-53页
   ·Indirect immunofiuorescence assay and confocal microscopy第53页
   ·LeptomycinB treatment第53页
   ·Flow cytometry and colony formation efficiency assays第53-54页
   ·Luciferase assay第54-56页
3 Results第56-88页
   ·SARS-CoV nucleocapsid protein gene sequence analysis第56-61页
   ·Expression and characterization of SARS-CoV recombinant nucleocapsid protein第61-62页
   ·Detection of IgG antibodies against N protein in the sera of SARS patients第62-65页
   ·Production and characterization of rabbit anti-nucleocapsid polyclonal antibodies第65-68页
   ·Intracellular localization of SARS-CoV N protein in infected and transfected cell lines第68-71页
   ·Subcellular localization of N protein alters upon N- and/or C-terminal deletion mutations第71-74页
   ·Expression and intracellular localization of N-GFP fusion proteins第74-77页
   ·The leucine rich region may act as nuclear export signal第77-80页
   ·Stable cell line constitutively expressing N protein affects cell cycle profile第80-83页
   ·SARS-CoV N protein can activates NF-kB in dose-dependent manner第83-86页
   ·The conformation of SARS-CoV N protein is important for its NF-kB activation第86-88页
4 Discussion第88-115页
5 References第115-147页
6 Acknowledgments第147-149页
7 List of Figures第149-151页
8 List of Tables第151-152页
9 Publications第152页

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