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谷胱甘肽基因的克隆表达及其抗紫外辐射功能的研究

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-9页
前言第9-17页
 1 谷胱甘肽第9-11页
 2 λ噬菌体第11-13页
 3 紫外线的诱导效应第13-14页
 4 自由基对生物大分子的损伤第14-15页
 5 本研究的目的与意义第15-17页
材料与方法第17-24页
 1 材料第17-18页
  1.1 菌株与质粒第17页
  1.2 培养基第17页
  1.3 主要试剂与药物第17-18页
  1.4 主要仪器第18页
 2 方法第18-24页
  2.1 基因gsh-Ⅱ在λ溶原菌中的克隆与表达第18-21页
   2.1.1 染色体DNA的提取与纯化第18-19页
   2.1.2 基因gsh-Ⅱ的PCR扩增第19页
   2.1.3 PCR产物的纯化第19页
   2.1.4 DNA限制性内切酶降解与连接第19页
   2.1.5 感受态细胞的制备第19-20页
   2.1.6 转化第20页
   2.1.7 转化子的鉴定第20-21页
  2.2 基因gsh-Ⅰ在λ溶原菌中的克隆与表达第21页
   2.2.1 基因gsh-Ⅰ的PCR扩增第21页
   2.2.2 DNA限制性内切酶降解,连接及转化第21页
   2.2.3 转化子的鉴定第21页
  2.3 基因gsh-Ⅰ,gsh-Ⅱ在λ溶原菌中的共表达第21页
  2.4 谷胱甘肽合成缺陷株的构建第21-22页
   2.4.1 cat基因片段的制备第21-22页
   2.4.2 电转化第22页
   2.4.3 重组菌株的鉴定第22页
   2.4.4 质粒pKD46的消除第22页
  2.5 不同溶原菌株中λ原噬菌体紫外诱导率的检测第22页
  2.6 不同λ溶原菌株紫外抗性的检测第22-23页
  2.7 外源谷胱甘肽对λ原噬菌体紫外诱导的影响第23页
   2.7.1 噬菌体裂解液的制备第23页
   2.7.2 噬菌体效价的测定第23页
  2.8 电子自旋共振检测第23-24页
结果第24-37页
 1 过量表达谷胱甘肽的突变菌株的构建与鉴定第24-28页
  1.1 gsh-Ⅱ基因在λ溶原菌中的克隆与表达第24-26页
   1.1.1 gsh-Ⅱ基因的PCR扩增第24页
   1.1.2 重组质粒的构建与转化第24页
   1.1.3 转化子的鉴定第24-26页
  1.2 gsh-Ⅰ基因在λ溶原菌中的克隆与表达第26-27页
   1.2.1 gsh-Ⅰ基因的PCR扩增第26页
   1.2.2 重组质粒的构建与转化第26-27页
   1.2.3 转化子的鉴定第27页
  1.3 基因gsh-Ⅰ,gsh-Ⅱ在入溶原菌中的串联表达第27-28页
   1.3.1 重组质粒的构建与转化第27页
   1.3.2 转化子的鉴定第27-28页
 2 谷胱甘肽合成缺陷菌株的构建与鉴定第28-31页
  2.1 PCR片段的制备第29页
  2.2 转化子的筛选和鉴定第29-31页
 3 各种λ溶原菌突变株细胞内GSH含量的测定第31-32页
 4 不同的谷胱甘肽含量对λ原噬菌体紫外诱导率的影响第32-34页
 5 不同的谷胱甘肽含量对λ溶原菌紫外抗性的影响第34-35页
 6 外源谷胱甘肽对λ原噬菌体紫外辐射的保护效率第35页
 7 λ原噬菌体紫外诱导过程中自由基的检测第35-37页
  7.1 紫外诱导溶原菌过程中自由基信号的ESR检测第35-36页
  7.2 不同GSH含量的λ溶原菌株紫外诱导过程中自由基信号的检测第36-37页
讨论第37-41页
 1 溶原菌中谷胱甘肽合成突变株的构建第37-38页
 2 谷胱甘肽对λ溶原菌抗紫外辐射的影响第38-39页
 3 谷胱甘肽抑制λ原噬菌体紫外诱导的机制第39页
 4 今后的研究方向第39-41页
主要参考文献第41-51页
在读期间所发表的论文目录第51-52页
致谢第52页

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