中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-9页 |
前言 | 第9-17页 |
1 谷胱甘肽 | 第9-11页 |
2 λ噬菌体 | 第11-13页 |
3 紫外线的诱导效应 | 第13-14页 |
4 自由基对生物大分子的损伤 | 第14-15页 |
5 本研究的目的与意义 | 第15-17页 |
材料与方法 | 第17-24页 |
1 材料 | 第17-18页 |
1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
1.2 培养基 | 第17页 |
1.3 主要试剂与药物 | 第17-18页 |
1.4 主要仪器 | 第18页 |
2 方法 | 第18-24页 |
2.1 基因gsh-Ⅱ在λ溶原菌中的克隆与表达 | 第18-21页 |
2.1.1 染色体DNA的提取与纯化 | 第18-19页 |
2.1.2 基因gsh-Ⅱ的PCR扩增 | 第19页 |
2.1.3 PCR产物的纯化 | 第19页 |
2.1.4 DNA限制性内切酶降解与连接 | 第19页 |
2.1.5 感受态细胞的制备 | 第19-20页 |
2.1.6 转化 | 第20页 |
2.1.7 转化子的鉴定 | 第20-21页 |
2.2 基因gsh-Ⅰ在λ溶原菌中的克隆与表达 | 第21页 |
2.2.1 基因gsh-Ⅰ的PCR扩增 | 第21页 |
2.2.2 DNA限制性内切酶降解,连接及转化 | 第21页 |
2.2.3 转化子的鉴定 | 第21页 |
2.3 基因gsh-Ⅰ,gsh-Ⅱ在λ溶原菌中的共表达 | 第21页 |
2.4 谷胱甘肽合成缺陷株的构建 | 第21-22页 |
2.4.1 cat基因片段的制备 | 第21-22页 |
2.4.2 电转化 | 第22页 |
2.4.3 重组菌株的鉴定 | 第22页 |
2.4.4 质粒pKD46的消除 | 第22页 |
2.5 不同溶原菌株中λ原噬菌体紫外诱导率的检测 | 第22页 |
2.6 不同λ溶原菌株紫外抗性的检测 | 第22-23页 |
2.7 外源谷胱甘肽对λ原噬菌体紫外诱导的影响 | 第23页 |
2.7.1 噬菌体裂解液的制备 | 第23页 |
2.7.2 噬菌体效价的测定 | 第23页 |
2.8 电子自旋共振检测 | 第23-24页 |
结果 | 第24-37页 |
1 过量表达谷胱甘肽的突变菌株的构建与鉴定 | 第24-28页 |
1.1 gsh-Ⅱ基因在λ溶原菌中的克隆与表达 | 第24-26页 |
1.1.1 gsh-Ⅱ基因的PCR扩增 | 第24页 |
1.1.2 重组质粒的构建与转化 | 第24页 |
1.1.3 转化子的鉴定 | 第24-26页 |
1.2 gsh-Ⅰ基因在λ溶原菌中的克隆与表达 | 第26-27页 |
1.2.1 gsh-Ⅰ基因的PCR扩增 | 第26页 |
1.2.2 重组质粒的构建与转化 | 第26-27页 |
1.2.3 转化子的鉴定 | 第27页 |
1.3 基因gsh-Ⅰ,gsh-Ⅱ在入溶原菌中的串联表达 | 第27-28页 |
1.3.1 重组质粒的构建与转化 | 第27页 |
1.3.2 转化子的鉴定 | 第27-28页 |
2 谷胱甘肽合成缺陷菌株的构建与鉴定 | 第28-31页 |
2.1 PCR片段的制备 | 第29页 |
2.2 转化子的筛选和鉴定 | 第29-31页 |
3 各种λ溶原菌突变株细胞内GSH含量的测定 | 第31-32页 |
4 不同的谷胱甘肽含量对λ原噬菌体紫外诱导率的影响 | 第32-34页 |
5 不同的谷胱甘肽含量对λ溶原菌紫外抗性的影响 | 第34-35页 |
6 外源谷胱甘肽对λ原噬菌体紫外辐射的保护效率 | 第35页 |
7 λ原噬菌体紫外诱导过程中自由基的检测 | 第35-37页 |
7.1 紫外诱导溶原菌过程中自由基信号的ESR检测 | 第35-36页 |
7.2 不同GSH含量的λ溶原菌株紫外诱导过程中自由基信号的检测 | 第36-37页 |
讨论 | 第37-41页 |
1 溶原菌中谷胱甘肽合成突变株的构建 | 第37-38页 |
2 谷胱甘肽对λ溶原菌抗紫外辐射的影响 | 第38-39页 |
3 谷胱甘肽抑制λ原噬菌体紫外诱导的机制 | 第39页 |
4 今后的研究方向 | 第39-41页 |
主要参考文献 | 第41-51页 |
在读期间所发表的论文目录 | 第51-52页 |
致谢 | 第52页 |