| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| ·真菌的遗传转化研究进展 | 第10页 |
| ·根癌农杆菌介导的真菌遗传转化的机理 | 第10-11页 |
| ·A. TUMEFACIENS TI 质粒载体系统的发展 | 第11-12页 |
| ·共整合载体系统 | 第11-12页 |
| ·双元载体系统 | 第12页 |
| ·转基因真菌的遗传表达 | 第12-15页 |
| ·复制型(replicate plasmid)质粒 | 第12-13页 |
| ·整合型质粒(integrative plasmid) | 第13-14页 |
| ·影响转基因表达的主要因素 | 第14-15页 |
| ·A.tumefaciens 介导转化方法的优点 | 第15页 |
| ·BAR 基因的作用机制、特性和研究运用 | 第15-16页 |
| ·立题意义和研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 一株降解除草剂膦化麦黄桐菌的筛选与鉴定 | 第18-25页 |
| ·材料与方法 | 第18-19页 |
| ·样品 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·生化试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19页 |
| ·耐除草剂PPT(膦化麦黄桐)菌株的筛选 | 第19页 |
| ·细菌生长测定 | 第19页 |
| ·菌株的鉴定 | 第19-20页 |
| ·菌株形态学、生理生化特征 | 第19页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·165 rDNA 的扩增 | 第20页 |
| ·PCR 扩增条件 | 第20页 |
| ·PCR 产物的克隆与165 rDNA 序列测定及同源性比较、系统分析 | 第20页 |
| ·结果 | 第20-23页 |
| ·菌种的分离 | 第20页 |
| ·不同浓度的PPT 对菌株细胞及降解PPT 能力的影响 | 第20-21页 |
| ·菌种的生理生化鉴定 | 第21-23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 影响根癌农杆菌电击转化条件的研究 | 第25-35页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料与方法 | 第25-29页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第26-27页 |
| ·生化试剂 | 第27页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第27页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·中间双元载体的构建 | 第28页 |
| ·根癌农杆菌的电击转化 | 第28页 |
| ·带有双元载体的根癌农杆菌培养 | 第28页 |
| ·农杆菌质粒DNA 提取方法 | 第28-29页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒介导转化 | 第29页 |
| ·丝状真菌染色体DNA 提取与Bar 基因PCR 扩增 | 第29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-33页 |
| ·不同电压对转化率的影响 | 第29-30页 |
| ·细胞生长时期对转化率的影响 | 第30页 |
| ·细胞浓度对转化率的影响 | 第30页 |
| ·质粒的大小对转化效率的影响 | 第30页 |
| ·转化子质粒的提取和酶切验证 | 第30-31页 |
| ·含有Bar 基因的丝状真菌的筛选 | 第31-32页 |
| ·PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·结论 | 第33-35页 |
| 第四章 根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母中的甘油合成关键酶基因GPD、GPP 转化丝状真菌 | 第35-49页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·工具酶和试剂 | 第36页 |
| ·培养基和试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器和设备 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·菌种的培养 | 第37页 |
| ·丝状真菌孢子的准备 | 第37页 |
| ·抗生素对菌株生长的影响 | 第37-38页 |
| ·分别含有GPD、GPP 基因的重组载体质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒介导的丝状真菌的转化方法 | 第39页 |
| ·丝状真菌染色体DNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·基因扩增 | 第40页 |
| ·转化子稳定性的检测 | 第40页 |
| ·发酵试验 | 第40页 |
| ·甘油含量测定方法 | 第40-42页 |
| ·残糖测定 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-47页 |
| ·抗生素对丝状真菌最小抑制浓度测定 | 第42页 |
| ·带CaMV355 启动子和Tnos 终止子GPD、GPP 基因的中间载体质粒的构建 | 第42-44页 |
| ·丝状真菌菌丝的共转化及抗性分析 | 第44-45页 |
| ·PCR 鉴定 | 第45-46页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒介导的丝状真菌转化方法的建立 | 第46页 |
| ·外源基因在转化子的传代中的稳定性 | 第46页 |
| ·GPD 及 GPP 对丝状真菌发酵的影响 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 论文主要结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 硕士研究生期间在科学技术期刊上发表的论文 | 第54页 |
