| 1 引言 | 第1-25页 |
| ·肠道致病菌快速检测技术研究的意义和必要性 | 第11-12页 |
| ·肠出血性大肠杆菌 O157：H7 和霍乱弧菌 O139 是最危险的食源性病原菌 | 第11-12页 |
| ·早期、快速、特异的检测是有效防治霍乱弧菌 O139 和肠出血性大肠杆菌O157：H7 等食源性病原体感染的关键 | 第12页 |
| ·相关领域国内外研究现状和发展趋势 | 第12-14页 |
| ·产毒性霍乱弧菌检测方法 | 第12页 |
| ·肠出血性大肠杆菌 O157：H7 检测方法 | 第12-13页 |
| ·现代分子诊断技术是病原微生物检测发展的主导方向 | 第13-14页 |
| ·霍乱弧菌 O139 研究历史 | 第14-16页 |
| ·霍乱弧菌 O139 流行病学和致病性 | 第14页 |
| ·霍乱弧菌 O139 培养特性和生化特征 | 第14页 |
| ·霍乱弧菌 O139 的分子生物学研究 | 第14-16页 |
| ·肠出血性大肠杆菌 O157：H7 研究历史 | 第16-20页 |
| ·肠出血性大肠杆菌O157：H7 培养特性和生化特征 | 第16-17页 |
| ·肠出血性大肠杆菌O157：H7 流行病学 | 第17页 |
| ·肠出血性大肠杆菌O157：H7 的分子生物学研究 | 第17-20页 |
| ·基因芯片（Genechip）技术的研究进展 | 第20-22页 |
| ·生物芯片的分类 | 第20-21页 |
| ·基因芯片的制备 | 第21页 |
| ·探针的杂交与检测 | 第21-22页 |
| ·cDNA 芯片与寡核苷酸芯片 | 第22页 |
| ·研究目的和内容 | 第22-25页 |
| 2 研究一寡核苷酸芯片制备工艺条件的确定 | 第25-38页 |
| ·材料与方法 | 第25-28页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·载玻片表面的化学处理 | 第25-26页 |
| ·荧光标记 PCR 产物的制备 | 第26-27页 |
| ·寡核苷酸的合成 | 第27页 |
| ·芯片的制备 | 第27页 |
| ·芯片的杂交与洗涤 | 第27页 |
| ·芯片的信号扫描与数据分析 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-34页 |
| ·荧光标记 PCR 产物的制备 | 第28页 |
| ·不同长度寡核苷酸探针对杂交信号强度的影响 | 第28-30页 |
| ·探针末端连接不同长度 PEG 连接臂对杂交信号强度的影响 | 第30-31页 |
| ·探针末端不同修饰对杂交信号强度的影响 | 第31-33页 |
| ·不同基片对杂交信号强度的影响 | 第33页 |
| ·芯片的重复性 | 第33-34页 |
| ·讨论与小结 | 第34-38页 |
| ·探针与片基化学结合方式对探针固定量和芯片检测灵敏度的影响 | 第35-36页 |
| ·探针连接臂对芯片检测灵敏度的影响 | 第36页 |
| ·探针长度对芯片杂交信号强度的影响 | 第36-38页 |
| 3 研究二肠出血性大肠杆菌O157:H7 和霍乱弧菌 O139 寡核苷酸检测芯片的制备 | 第38-71页 |
| ·实验一目的基因的 PCR 检测及序列鉴定 | 第38-45页 |
| ·材料与方法 | 第38-40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·讨论与小结 | 第45页 |
| ·实验二多重不对称 PCR 反应体系的优化 | 第45-52页 |
| ·材料与方法 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-51页 |
| ·讨论与小结 | 第51-52页 |
| ·实验三探针筛选和芯片制备 | 第52-71页 |
| ·材料与方法 | 第53-59页 |
| ·结果 | 第59-69页 |
| ·讨论和小结 | 第69-71页 |
| 4 研究三杂交反应体系的优化 | 第71-79页 |
| ·材料与方法 | 第71-72页 |
| ·材料 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71页 |
| ·探针设计 | 第71页 |
| ·引物设计 | 第71页 |
| ·寡核苷酸的合成 | 第71页 |
| ·寡核苷酸含量测定(分光光度法) | 第71-72页 |
| ·寡核苷酸芯片的制备 | 第72页 |
| ·寡核苷酸芯片的阵列示意图 | 第72页 |
| ·PCR 反应 | 第72页 |
| ·杂交和信号检测 | 第72页 |
| ·结果 | 第72-77页 |
| ·PCR 产物进行未变性与变性处理对杂交结果的影响 | 第72-73页 |
| ·杂交时间对杂交结果的影响 | 第73-74页 |
| ·杂交温度对杂交结果的影响 | 第74-75页 |
| ·杂交液成分对杂交结果的影响 | 第75-77页 |
| ·讨论与小结 | 第77-79页 |
| 5 研究四肠出血性大肠杆菌 O157:H7 和霍乱弧菌 O139 病原体检测芯片的性能评价 | 第79-86页 |
| ·材料与方法 | 第79-80页 |
| ·菌株及临床标本 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79页 |
| ·探针序列 | 第79页 |
| ·引物设计 | 第79页 |
| ·寡核苷酸芯片的制备 | 第79页 |
| ·寡核苷酸芯片的阵列示意图 | 第79-80页 |
| ·PCR 反应 | 第80页 |
| ·芯片的杂交与洗涤 | 第80页 |
| ·芯片的扫描与信号检测 | 第80页 |
| ·结果 | 第80-84页 |
| ·基因芯片检测的灵敏度 | 第80-81页 |
| ·基因芯片检测的特异性 | 第81-83页 |
| ·临床样本检测 | 第83-84页 |
| ·讨论与小结 | 第84-86页 |
| 6 全文总结 | 第86-88页 |
| 7 结论 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 作者简介 | 第99页 |
