| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一章 检疫性实蝇(双翅目:实蝇科)分类鉴定研究概述 | 第16-30页 |
| 1 实蝇的识别 | 第17-19页 |
| ·按实蝇属Anastrepha | 第18-19页 |
| ·小条实蝇属Ceratitis | 第19页 |
| ·绕实蝇属Rhagoletis | 第19页 |
| ·寡鬃实蝇族Dacini | 第19页 |
| 2 实蝇的经济重要性 | 第19-22页 |
| ·果实蝇属Bactrocera | 第20-21页 |
| ·小条实蝇属Ceratitis | 第21页 |
| ·按实蝇属Anastrepha | 第21页 |
| ·绕实蝇属Rhagoletis | 第21页 |
| ·寡鬃实蝇属Dacus | 第21-22页 |
| 3 实蝇的扩散 | 第22-24页 |
| 4 实蝇的分类和鉴定 | 第24-30页 |
| ·分类现状 | 第24-26页 |
| ·实蝇的鉴定 | 第26-30页 |
| ·形态学鉴定 | 第26-27页 |
| ·分子生物学鉴定 | 第27-30页 |
| 第二章 检疫性实蝇mtDNA COI 基因序列比较研 | 第30-45页 |
| 引言 | 第30-32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-39页 |
| ·实蝇标本 | 第32页 |
| ·实蝇基因组DNA 提取方法 | 第32-35页 |
| ·Dneasy Tissue Kit提取方法 | 第34页 |
| ·基因谷动物组织DNA 提取试剂盒方法 | 第34-35页 |
| ·DNA 质量检查 | 第35-36页 |
| ·目标片断PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增引物和测序引物 | 第36页 |
| ·PCR 扩增体系 | 第36页 |
| ·PCR 扩增条件 | 第36-37页 |
| ·实蝇COI 基因序列测定 | 第37-38页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第37-38页 |
| ·PCR 产物直接纯化 | 第37页 |
| ·琼脂糖电泳割胶纯 | 第37-38页 |
| ·测序 | 第38页 |
| ·基因序列比较 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-42页 |
| ·DNA 质量检查 | 第39页 |
| ·检疫性实蝇mtDNA COI基因序列 | 第39-40页 |
| ·检疫性实蝇同源序列比较分析 | 第40-41页 |
| ·COI 基因组成 | 第40-41页 |
| ·碱基替换和颠换频率 | 第41页 |
| ·遗传距离 | 第41页 |
| ·桔小实蝇复合种COI 基因相似度 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 检疫性实蝇SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定技术研究 | 第45-71页 |
| 引言 | 第45-46页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| ·实蝇标本 | 第46页 |
| ·基因组DNA | 第46-47页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·SYBR Green 实时荧光PCR | 第48-49页 |
| ·溶解曲线分析Melting Curve Analysis | 第49页 |
| ·琼脂凝胶电泳分析Agarose Gel Electriphoresis | 第49页 |
| ·数据分析 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-67页 |
| ·辣椒实蝇SYBR Green实时荧光PCR鉴定方法的建立 | 第50-54页 |
| ·引物lati-F1/lati-R1特异性验证 | 第50页 |
| ·SYBR Green 实时荧光PCR 检测灵敏度 | 第50-53页 |
| ·SYBR Green实时荧光PCR在实蝇快速鉴定上的应用 | 第53-54页 |
| ·引物capa-F/capa-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定地中海实蝇 | 第54页 |
| ·引物bact-F/bact-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定果实蝇亚属 | 第54-63页 |
| ·引物docp-F | 第56-57页 |
| ·引物papa-F/papa-R SYBR Green实时荧光PCR鉴定木瓜实蝇 | 第57-58页 |
| ·引物camb-F/camb-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定杨桃实蝇 | 第58-59页 |
| ·引物phil-F/phil-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定菲律宾实蝇 | 第59-61页 |
| ·引物occi-F/occi-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定芒果实蝇 | 第61-62页 |
| ·引物corr-L/corr-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定番石榴实蝇 | 第62-63页 |
| ·SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定瓜实蝇和南瓜实蝇 | 第63-66页 |
| ·亚属特异引物zeau-F/zeau-R 区分果实蝇亚属和寡鬃实蝇亚属 | 第63-64页 |
| ·引物cucu -F/cucu-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定瓜实蝇 | 第64-65页 |
| ·引物tau-F/tau-R SYBR Green 实时荧光PCR 鉴定南瓜实蝇 | 第65-66页 |
| ·SYBR Green实时荧光PCR特异引物扩增目标片段与溶解温度关系 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-71页 |
| 第四章 检疫性实蝇常规PCR 鉴定技术研究 | 第71-84页 |
| 引言 | 第71-72页 |
| 1 材料与方法 | 第72-74页 |
| ·实蝇标本和DNA基因组 | 第72页 |
| ·引物设计 | 第72页 |
| ·常规PCR 扩增反应 | 第72-73页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第73页 |
| ·PCR 产物序列分析 | 第73-74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-82页 |
| ·SS-PCR 鉴定辣椒实蝇 | 第74-76页 |
| ·引物特异性验证 | 第74-75页 |
| ·SS-PCR 方法的检测灵敏度 | 第75页 |
| ·SS-PCR 在实蝇快速鉴定上的应用 | 第75-76页 |
| ·SS-PCR 鉴定地中海实蝇 | 第76-77页 |
| ·SS-PCR 鉴定果实蝇亚属实蝇 | 第77-81页 |
| ·SS-PCR 鉴定桔小实蝇复合种 | 第77-78页 |
| ·SS-PCR 鉴定木瓜实蝇 | 第78页 |
| ·SS-PCR 鉴定杨桃实蝇 | 第78-79页 |
| ·SS-PCR 鉴定菲律宾实蝇 | 第79页 |
| ·SS-PCR 鉴定芒果实蝇 | 第79-80页 |
| ·SS-PCR 鉴定番石榴实蝇 | 第80-81页 |
| ·SS-PCR 鉴定Zeugodacus 亚属 | 第81-82页 |
| ·SS-PCR 鉴定瓜实蝇 | 第82页 |
| ·SS-PCR 鉴定南瓜实蝇 | 第82页 |
| ·SS-PCR 产物测序 | 第82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 第五章 检疫性实蝇TaqMan MGB 探针实时荧光PCR 鉴定技术研究 | 第84-98页 |
| 引言 | 第84-85页 |
| 1 材料与方法 | 第85-87页 |
| ·实验材料 | 第85页 |
| ·TaqMan MGB 探针和引物设计与合成 | 第85-87页 |
| ·TaqMan MGB 探针实时荧光PCR 扩增反应 | 第87页 |
| ·数据分析 | 第87页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-98页 |
| ·TaqMan MGB 探针和引物特异性验证 | 第88-93页 |
| ·TaqMan MGB实时荧光PCR方法验证引物lati-F2/lati-R2特异 | 第89-90页 |
| ·SYBR Green 实时荧光PCR 方法验证引物lati-F2/lati-R2 特异性 | 第90-93页 |
| ·TaqMan MGB 实时荧光PCR 在辣椒实蝇快速鉴定上的应用 | 第93页 |
| ·TaqMan MGB 实时荧光PCR 快速鉴定地中海实蝇 | 第93页 |
| ·TaqMan MGB 实时荧光PCR 快速鉴定三带实蝇 | 第93-95页 |
| ·TaqMan MGB 实时荧光PCR 快速鉴定瓜实蝇 | 第95页 |
| 3 讨论 | 第95-98页 |
| 第六章 检疫性实蝇mtDNA COI 基因片段克隆 | 第98-106页 |
| 引言 | 第98-99页 |
| 1 材料与方法 | 第99-102页 |
| ·检疫性实蝇标本 | 第99页 |
| ·目标片段常规PCR 扩增 | 第99-100页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第100页 |
| ·载体连接 | 第100页 |
| ·转化 | 第100-101页 |
| ·重组克隆筛选―蓝/白斑筛选 | 第101页 |
| ·测序 | 第101页 |
| ·克隆片段SYBR Green和TaqMan MGB实时荧光PCR检测 | 第101-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-104页 |
| ·检疫性实蝇mtDNA COI基因片段克隆 | 第102页 |
| ·DNA 克隆片段常规PCR 检测 | 第102-103页 |
| ·实蝇克隆片段在快速检疫鉴定上的应用 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 总讨论 | 第106-113页 |
| 结论 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-128页 |
| 附录1 SYBR Green实时荧光PCR和种特异引物PCR产物片段 | 第128-130页 |
| 附录2 TaqMan MGB探针实时荧光PCR产物片段 | 第130-131页 |
| 附录3 本研究建立的分子生物学方法鉴定检疫性实蝇一览表 | 第131-132页 |
| 附录4 本研究科研项目经费资助来源 | 第132-133页 |
| 附录5 在读期间发表论文、会议报告 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
