中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-7页 |
一. 文献综述 | 第7-20页 |
1.1 植物生物反应器 | 第7-12页 |
1.1.1 基本概念与表达系统 | 第7页 |
1.1.2 植物生物反应器的优势 | 第7-8页 |
1.1.3 利用植物生物反应器生产大分子物质 | 第8-11页 |
1.1.4 用于植物生物反应器的植物 | 第11页 |
1.1.5 问题与对策探讨 | 第11-12页 |
1.2 油体和油体相关蛋白 | 第12-15页 |
1.2.1 油体大小、结构与组成 | 第13页 |
1.2.2 油体相关蛋白 | 第13-14页 |
1.2.3 油体的形成与分解及其生物学功能 | 第14-15页 |
1.3 油体蛋白oleosin | 第15-20页 |
1.3.1 Oleosin的组成、类型与分布 | 第15页 |
1.3.2 Oleosin的结构和功能 | 第15-17页 |
1.3.3 Oleosin基因及其表达 | 第17-18页 |
1.3.4 Oleosin在基因工程方面的应用 | 第18-20页 |
二. 引言 | 第20-21页 |
三. 材料与方法 | 第21-28页 |
3.1 实验材料 | 第21-22页 |
3.1.1 植物材料 | 第21页 |
3.1.2 菌种和质粒 | 第21页 |
3.1.3 主要试剂 | 第21页 |
3.1.4 主要仪器 | 第21页 |
3.1.5 培养基 | 第21页 |
3.1.6 常用溶液 | 第21-22页 |
3.2 实验方法 | 第22-28页 |
3.2.1 植物总DNA的提取 | 第22-23页 |
3.2.2 PCR引物设计 | 第23页 |
3.2.3 目的基因的聚合酶链式反应 | 第23页 |
3.2.4 重组子的鉴定 | 第23-24页 |
3.2.5 序列分析与结构预测的方法 | 第24页 |
3.2.6 农杆菌的培养与活化 | 第24页 |
3.2.7 植物细胞转化 | 第24页 |
3.2.8 GUS活性的组织染色法 | 第24页 |
3.2.9 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
3.2.10 农杆菌质粒DNA的提取 | 第25-26页 |
3.2.11 质粒DNA的纯化 | 第26页 |
3.2.12 DNA限制性内切酶反应 | 第26页 |
3.2.13 DNA片段的连接 | 第26页 |
3.2.14 DNA片段的回收 | 第26-27页 |
3.2.15 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第27页 |
3.2.16 农杆菌感受态的制备及转化 | 第27-28页 |
四. 结果与分析 | 第28-43页 |
4.1 油菜Oleosin基因OTS的克隆与序列分析 | 第28-32页 |
4.1.1 PCR扩增及其产物克隆鉴定 | 第28页 |
4.1.2 PCR扩增片段的序列测定与分析 | 第28-32页 |
4.2 Oleosin基因OTS与GUS基因的融合及融合子序列分析 | 第32-34页 |
4.2.1 融合子重组质粒pUC-OTS-GUS的构建 | 第32页 |
4.2.2 融合子重组质粒pUC-OTS-GUS的酶切验证 | 第32-34页 |
4.2.3 融合子OTS-GUS的序列分析 | 第34页 |
4.3 OTS-GUS融合蛋白结构与性质预测分析 | 第34-36页 |
4.3.1 理化特性曲线预测 | 第34-35页 |
4.3.2 二级结构预测 | 第35页 |
4.3.3 跨膜区和潜在信号肽切割位点预测 | 第35-36页 |
4.4 OTS-GUS融合子植物表达载体的构建 | 第36-41页 |
4.4.1 OTS-GUS融合子35S启动子植物表达载体pBI35S-OTS121的构建 | 第36-38页 |
4.4.2 OTS-GUS融合子Lea启动子植物表达载体pBI-Lea-OTS121的构建 | 第38页 |
4.4.3 OTS-GUS融合子Napin启动子植物表达载体pBI-Napin-OTS121的构建 | 第38-41页 |
4.5 OTS-GUS融合子中GUS基因瞬时表达的检测 | 第41-43页 |
五. 讨论 | 第43-47页 |
5.1 扩增获得的OTS基因特点与功能 | 第43页 |
5.2 基因融合及其预测分析 | 第43-44页 |
5.3 融合子OTS-GUS基因启动子的选用 | 第44-45页 |
5.4 Gus基因的瞬时表达 | 第45-47页 |
六. 结论 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-52页 |
缩略词表 | 第52-53页 |
附录 | 第53-54页 |
致谢 | 第54页 |