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盐碱地星星草(Puccinellia tenuiflora)根cDNA文库构建与PtLIR1克隆及表达分析

摘要第1-12页
ABSTRACT第12-15页
第1章 绪论第15-31页
   ·土壤盐害对植物的影响第15-16页
   ·植物根系的耐盐机理第16-24页
     ·植物根系的结构与功能第16页
     ·盐胁迫下植物根系形态结构的变化第16-17页
     ·离子平衡调节第17-18页
     ·渗透平衡调节第18-20页
     ·氧化还原平衡调节第20-21页
     ·植物根系响应盐胁迫的信号途径第21-22页
     ·植物根系响应盐胁迫的转录因子第22-24页
   ·全长cDNA文库构建技术第24-26页
     ·CAPture法第25页
     ·Oligo-capping法第25页
     ·Cap-trapper法第25-26页
     ·SMART法第26页
   ·星星草的生物学特征第26-27页
   ·星星草耐盐碱机制研究进展第27-28页
     ·星星草耐盐碱生理机制研究进展第27页
     ·星星草耐盐碱分子机制研究进展第27-28页
   ·星星草蔗糖合成酶基因(Sucrose synthase, SS)基因及其与植物抗逆性的关系第28页
   ·星星草光诱导蛋白(Light-induced protein 1-like, LIR1)基因及其与植物抗逆性的关系第28-29页
   ·技术路线第29页
   ·立题研究的目的与意义第29-31页
第2章 盐碱地星星草根cDNA文库构建与初步分析第31-46页
   ·实验材料第31-33页
     ·植物材料第31页
     ·酶和生化试剂第31页
     ·主要试剂和培养基的配制第31-32页
     ·主要仪器设备第32页
     ·引物第32-33页
   ·实验方法第33-39页
     ·SMARTTMcDNA文库构建流程图第33-34页
     ·星星草根部总RNA的提取第34页
     ·星星草根部总RNA的纯化第34-35页
     ·cDNA第一条链的合成第35-36页
     ·cDNA第二条链的合成第36页
     ·蛋白酶K消化以及cDNA纯化第36-37页
     ·SfiⅠ酶切与cDNA分级分离第37页
     ·连接第37-38页
     ·电击转化第38页
     ·文库滴度测定第38页
     ·插入片段的PCR检测第38-39页
     ·文库质量的初步检测第39页
   ·结果与分析第39-43页
     ·盐碱地星星草根系总RNA的提取及纯化第39页
     ·双链cDNA的合成第39-40页
     ·cDNA文库的鉴定第40-41页
     ·插入片段检测第41页
     ·测序结果初步分析第41-43页
   ·讨论第43-45页
     ·SMART技术的优越性第43页
     ·文库转化率第43页
     ·盐碱地星星草根SMART cDNA文库的构建策略第43-44页
     ·文库结果的初步分析第44-45页
   ·本章小结第45-46页
第3章 星星草光诱导蛋白基因(Light induced protein 1-like,PtLIR1)的克隆与Na_2CO_3胁迫条件下的表达特性分析第46-63页
   ·实验材料第46-47页
     ·植物材料第46页
     ·酶和生化试剂第46页
     ·主要试剂和培养基的配制第46-47页
     ·主要仪器设备第47页
     ·引物第47页
   ·星星草PtLIR1基因的克隆第47-51页
     ·星星草总RNA的提取以及纯化第47-48页
     ·星星草总RNA的反转录第48页
     ·PtLIR1基因的PCR扩增第48-49页
     ·星星草PtLIR1基因克隆载体pT-PtLIR1的构建第49-51页
   ·Na_2CO_3胁迫条件下星星草PtLIR1基因的表达特性分析第51-53页
     ·星星草总RNA的提取以及纯化第51-52页
     ·星星草总RNA的反转录第52页
     ·星星草内参基因PtTubulin与目的基因PtLIR1的PCR扩增第52-53页
     ·数据处理第53页
   ·结果与分析第53-60页
     ·星星草PtLIR1基因的克隆第53-56页
     ·星星草PtLIR1基因的半定量RT-PCR分析第56-60页
   ·讨论第60-61页
     ·星星草PtLIR1基因的克隆第60页
     ·星星草PtLIR1基因表达的器官特异性第60-61页
     ·星星草PtLIR1基因响应Na_2CO_3胁迫的表达特性第61页
   ·本章小结第61-63页
第4章 星星草光诱导蛋白基因PtLIR1的植物表达载体的构建第63-77页
   ·实验材料第63-64页
     ·菌株及载体第63页
     ·酶及生化试剂第63页
     ·主要试剂和培养基的配制第63页
     ·主要仪器设备第63页
     ·引物第63-64页
   ·实验方法第64-68页
     ·表达载体构建流程图第64页
     ·星星草PtLIR1基因(non-stop)克隆载体pT-PtLIR1(non-stop)的构建第64-66页
     ·pT-PtLIR1(non-stop)质粒的提取第66页
     ·PtLIR1(non-stop)克隆载体的双酶切第66页
     ·植物表达载体pGFP-35S的双酶切第66页
     ·pT-PtLIR1(non-stop)与pGFP-35S酶切产物的胶回收第66-67页
     ·PtLIR1(non-stop)基因片段与植物表达载体pGFP-35S的连接第67页
     ·连接产物的转化第67页
     ·阳性重组子的菌落PCR第67-68页
     ·阳性重组子的质粒提取第68页
     ·阳性重组子的双酶切鉴定第68页
   ·结果与分析第68-75页
     ·PtLIR1(non-stop)基因克隆载体的构建第68-70页
     ·pT-PtLIR1(non-stop)与pGFP-35S质粒的提取第70-75页
   ·讨论第75-76页
     ·绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)第75-76页
     ·表达载体的构建策略第76页
   ·本章小结第76-77页
第5章 星星草蔗糖合成酶(Sucrose synthease,SS)基因与PtLIR1基因的协同性分析第77-92页
   ·实验材料第77-78页
     ·植物材料第77页
     ·酶和生化试剂第77页
     ·主要试剂的配制第77-78页
     ·引物第78页
     ·主要仪器设备第78页
   ·实验方法第78-82页
     ·Na_2CO_3胁迫条件下星星草PtSS基因的表达特性分析第78-80页
     ·星星草可溶性糖含量的测定第80-81页
     ·星星草蔗糖含量的测定第81-82页
   ·结果分析与讨论第82-91页
     ·星星草总RNA的提取第82页
     ·半定量RT-PCR反应条件的优化第82-83页
     ·星星草根PtSS基因对Na_2CO_3胁迫的响应第83-84页
     ·Na_2CO_3胁迫条件下星星草根中可溶性糖和蔗糖含量的变化第84-87页
     ·Na_2CO_3胁迫下PtLIR1基因的表达与可溶性糖和蔗糖含量的相关性.第87-89页
     ·Na_2CO_3胁迫下星星草根 PtLIR1 基因与 PtSS 基因对蔗糖积累的协同调节第89-91页
   ·本章小结第91-92页
结论第92-94页
参考文献第94-102页
攻读硕士学位期间所发表的学术论文第102-103页
致谢第103页

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