| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-26页 |
| 实验材料 | 第26-34页 |
| 实验方法 | 第34-44页 |
| 1 大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第34页 |
| 2 大肠杆菌质粒DNA大量提取 | 第34页 |
| 3 链霉菌质粒DNA的提取 | 第34-35页 |
| 4 链霉菌总DNA的提取 | 第35-36页 |
| 5 大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 6 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第36页 |
| 7 原生质体的制备、质粒DNA转化 | 第36-37页 |
| 8 DNA酶切和连接 | 第37-38页 |
| 9 DNA电泳和片段回收 | 第38页 |
| 10 Klenow酶补平实验 | 第38-39页 |
| 11 接合转移实验 | 第39页 |
| 12 PCR反应 | 第39-40页 |
| 13 黑暗链霉菌发酵及检测操作的实验方法 | 第40-43页 |
| ·发酵流程 | 第40页 |
| ·发酵单位的测定 | 第40-42页 |
| ·抗生素组分检测 | 第42-43页 |
| 14 NTG诱变方法 | 第43-44页 |
| ·单孢子悬液的制备 | 第43页 |
| ·出发菌株自然分离 | 第43页 |
| ·NTG处理单孢子悬液 | 第43页 |
| ·NTG复合妥布霉素耐受处理 | 第43-44页 |
| 结果与讨论 | 第44-72页 |
| 第一部分 抗性上游基因的克隆及序列分析 | 第44-45页 |
| 第二部分 抗性下游基因的克隆及序列分析 | 第45-55页 |
| ·抗性下游基因的亚克隆 | 第45-46页 |
| ·测序结果 | 第46-50页 |
| ·测序结果的Frameplot分析和蛋白同源性比较分析 | 第50-55页 |
| 第三部分 克隆基因功能的初步研究 | 第55-69页 |
| ·接合转移质粒的构建 | 第56-60页 |
| ·接合转移试验 | 第60-61页 |
| ·基因重组菌株的获得 | 第61-62页 |
| ·基因重组菌株H6-42-4体内游离质粒考察 | 第62页 |
| ·基因重组菌株稳定性考察 | 第62-63页 |
| ·PCR实验 | 第63-64页 |
| ·引物设计 | 第63-64页 |
| ·PCR产物 | 第64页 |
| ·基因整合分析 | 第64-66页 |
| ·安普霉素生物合成过程中aprC、aprD基因作用的推测 | 第66-69页 |
| 第四部分 妥布霉素高产菌株菌种选育 | 第69-72页 |
| ·出发菌株的确定及其生产能力的考察 | 第69-70页 |
| ·二剂量法测定出发菌株实际效价 | 第70页 |
| ·NTG及NTG复合妥布霉素耐受处理诱变育种 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 发表文章目录 | 第81页 |