| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 一． 引言 | 第10-26页 |
| 1 草甘膦特性 | 第10-11页 |
| 1．1 草甘膦的理化性质 | 第10页 |
| 1．2 草甘膦的生物优越性 | 第10-11页 |
| 2 草甘膦的作用机理 | 第11-13页 |
| 3 草甘膦作用靶酶-EPSP合成酶及其编码基因的研究进展 | 第13-16页 |
| 3．1 草甘膦作用靶酶-EPSP合成酶及其编码基因的确定 | 第14页 |
| 3．2 EPSP合成酶的分类 | 第14页 |
| 3．3 EPSP合成酶的定位 | 第14页 |
| 3．4 EPSP合成酶的三维结构与活性区 | 第14-15页 |
| 3．5 EPSP合成酶的分子生物学研究 | 第15-16页 |
| 4 草甘膦抗性获得途径及抗草甘膦转基因植物的研究 | 第16-22页 |
| 4．1 芳香族氨基酸的加入对草甘膦毒性的缓解和逆转作用 | 第16-17页 |
| 4．2 增加EPSP合成酶的活性和表达量可降低草甘膦的抑制作用 | 第17页 |
| 4．3 通过点突变aroA基因降低EPSP合成酶对草甘磷的亲和性产生草甘膦抗性 | 第17-18页 |
| 4．4 其它抗草甘膦基因igrA | 第18-19页 |
| 4．5 通过逐步提高草甘膦的浓度获得抗性植物——生物体EPSP合成酶的自我扩增 | 第19页 |
| 4．6 选取不同来源的aroA基因应用摇摆延伸（staggered extension）方法获得抗草甘膦的EPSP合成酶基因 | 第19页 |
| 4．7 抗草甘膦的转基因植物的构建及安全性评价 | 第19-22页 |
| 5 草甘膦降解途径及其相关基因的研究 | 第22-24页 |
| 5．1 降解草甘膦细菌的分离和降解途径的研究 | 第22页 |
| 5．2 降解草甘膦基因的研究 | 第22-24页 |
| 6 本文研究内容和立题依据 | 第24-26页 |
| 二． 材料与方法 | 第26-35页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1．1 菌株来源 | 第26页 |
| 1．2 质粒 | 第26页 |
| 1．3 试剂 | 第26页 |
| 1．4 培养基 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2．1 菌株的草甘膦耐受性检测及高抗菌株的获得 | 第27页 |
| 2．2 菌种的鉴定 | 第27-30页 |
| 2．2．1 菌种的16SrDNA的克隆和序列分析 | 第27-30页 |
| 2．3 传统表型分类法鉴定菌株类型 | 第30页 |
| 2．4 粘粒基因组文库的构建 | 第30-32页 |
| 2．4．1 G2 DNA插入片段的制备 | 第30-31页 |
| 2．4．2 粘粒载体pLA2917／BSlⅡ的制备 | 第31页 |
| 2．4．3 插入片段和粘粒载体连接 | 第31页 |
| 2．4．4 插连接产物的包装和转染 | 第31-32页 |
| 2．4．5 粘粒包装反应滴度的测定 | 第32页 |
| 2．5 筛选草甘膦抗性转化子 | 第32-33页 |
| 2．6 草甘膦抗性克隆亚克隆的构建 | 第33-34页 |
| 2．7 EPSP合成酶互补试验 | 第34-35页 |
| 三． 结果与讨论 | 第35-56页 |
| 1 极端污染环境下G2菌株的筛选与菌株鉴定 | 第35-40页 |
| 1．1 草甘膦抗性菌株的耐受性及抗生素抗性检测 | 第35-37页 |
| 1．1．1 草甘膦抗性菌株的耐受性检测及高抗菌株的确定 | 第35-36页 |
| 1．1．2 草甘膦抗性菌株的抗生素抗性检测 | 第36-37页 |
| 1．2 G216SrDNA的测序和序列分析 | 第37-39页 |
| 1．3 传统表型分类法鉴定菌种类型 | 第39页 |
| 1．4 G2菌株的超微结构 | 第39-40页 |
| 2 讨论 | 第40-41页 |
| 2．1 细菌的分类鉴定方法 | 第40-41页 |
| 2．2 16SrRNA系统发育地位的确立及其意义 | 第41页 |
| 3 G2基因组粘粒文库的构建及滴度测定 | 第41-44页 |
| 3．1 荧光假单胞菌G2的DNA粘粒文库的构建 | 第41-42页 |
| 3．2 基因组DNA部分酶切片段的制备 | 第42-44页 |
| 3．3 文库滴度的确定 | 第44页 |
| 4 筛选草甘膦抗性转化子 | 第44-45页 |
| 5 草甘膦抗性克隆亚克隆的构建 | 第45-48页 |
| 5．1 pGR3及其亚克隆 | 第45-46页 |
| 5．2vpGR7及其亚克隆 | 第46-47页 |
| 5．3 草甘膦抗性克隆pGR3、pGR7和亚克隆pGR3H1、pGR7H1的草甘膦耐受浓度检测 | 第47-48页 |
| 5．4 EPSP合成酶互补试验 | 第48页 |
| 6 讨论 | 第48-56页 |
| 6．1 荧光假单胞菌G2菌株aroA基因密码子的偏爱性分析 | 第48-49页 |
| 6．2 pGR3H1与pGR7H1所包含EPSP合成酶基因两侧序列的比较 | 第49页 |
| 6．3 不同物种来源的EPSP合成酶氨基酸序列与分类学关系 | 第49-50页 |
| 6．4 荧光假单胞菌G2推导的EPSP合成酶序列与其它物种的EPSP合成酶序列比较 | 第50页 |
| 6．5 荧光假单胞菌G2菌株EPSP合成酶基因获得的意义 | 第50-56页 |
| 四． 结论 | 第56-57页 |
| 五． 参考文献 | 第57-65页 |
| 六． 附录 | 第65-77页 |
| 七． 致谢 | 第77页 |
