| 内容提要 | 第1-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-53页 |
| 第一章 口蹄疫病毒基因组结构、功能及致病分子机制 | 第15-33页 |
| 1 口蹄疫病毒基因组的结构及功能 | 第15-24页 |
| ·口蹄疫病毒基因组的基本结构 | 第15-17页 |
| ·5＇非翻译区(5＇UTR) | 第17-19页 |
| ·3＇非翻译区(3＇UTR) | 第19-20页 |
| ·开放阅读框(ORF) | 第20-24页 |
| 2 口蹄疫病毒致病的分子机制 | 第24-29页 |
| ·口蹄疫病毒的感染过程 | 第24-26页 |
| ·口蹄疫病毒的感染对宿主细胞的作用 | 第26-27页 |
| ·细胞受体在口蹄疫病毒感染过程中的作用 | 第27-29页 |
| 3 FMDV 持续感染机制研究进展 | 第29-33页 |
| ·干扰机体免疫反应 | 第29-30页 |
| ·免疫逃避 | 第30-31页 |
| ·病毒变异 | 第31-33页 |
| 第二章 RNA 干扰的分子机制与抗病毒应用 | 第33-53页 |
| 1 RNAi 的发现和命名 | 第33-35页 |
| 2 RNAi 的分子机制 | 第35-42页 |
| ·dsRNA 介导的RNA 干扰 | 第35-39页 |
| ·miRNA 介导的RNA 干扰 | 第39-42页 |
| 3 RNAi 的生物学意义 | 第42-43页 |
| 4 RNAi 在抗病毒感染中的应用 | 第43-53页 |
| ·RNAi 技术在抗病毒领域的探索 | 第43-48页 |
| ·RNAi 技术运用于抗病毒感染遇到的问题及应对策略 | 第48-53页 |
| 第二篇 研究内容 | 第53-141页 |
| 第一章 口蹄疫病毒siRNA 的设计及表达载体的构建 | 第53-81页 |
| 1 材料与方法 | 第54-60页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| 2 结果 | 第60-76页 |
| ·FMDV 基因组IRES、2B、2C、3D 序列同源性分析结果 | 第60页 |
| ·IRES、2B、2C、3D 序列二级结构预测结果 | 第60-61页 |
| ·靶序列的选择结果 | 第61页 |
| ·siRNA 靶序列自身的二级结构预测结果 | 第61-68页 |
| ·靶序列同源性分析结果 | 第68-71页 |
| ·表达shRNA 的DNA 插入片段制备 | 第71-74页 |
| ·pSilencer 1.0-U6-shRNA 表达质粒的构建及鉴定 | 第74-75页 |
| ·重组质粒的大量制备与纯化 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-79页 |
| ·关于干扰靶区的确定 | 第76-77页 |
| ·关于干扰靶区RNA 序列的二级结构预测 | 第77页 |
| ·关于siRNAs 序列的选择 | 第77-78页 |
| ·关于siRNAs 的制备 | 第78-79页 |
| 4 小结 | 第79-81页 |
| 第二章 质粒表达的shRNA 对2B 基因在BHK-21 细胞中表达的抑制 | 第81-103页 |
| 1 材料与方法 | 第81-92页 |
| ·材料 | 第81-83页 |
| ·方法 | 第83-92页 |
| 2 结果 | 第92-100页 |
| ·2B 基因的RT-PCR 扩增结果 | 第92-93页 |
| ·pEGFP+2B 重组质粒鉴定 | 第93-94页 |
| ·重组质粒pEGFP+2B 荧光表达检测 | 第94-95页 |
| ·shRNA 表达质粒抑制EGFP+2B 融合蛋白表达 | 第95-100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 第三章 靶向基因组保守区的RNAi 体外抑制口蹄疫病毒的复制 | 第103-123页 |
| 1 材料与方法 | 第104-109页 |
| ·材料 | 第104-105页 |
| ·方法 | 第105-109页 |
| 2 结果 | 第109-119页 |
| ·口蹄疫病毒的培养及病毒滴度测定 | 第109-111页 |
| ·shRNA 表达质粒抑制口蹄疫病毒在BHK-21 细胞中的复制 | 第111-112页 |
| ·shRNA表达质粒抑制口蹄疫病毒在PK-15细胞中的复制 | 第112-115页 |
| ·shRNA 表达质粒抑制口蹄疫病毒在IBRS-2 细胞中的复制 | 第115-119页 |
| 3 讨论 | 第119-121页 |
| ·关于不同细胞上的干扰效果 | 第119-120页 |
| ·关于pSi-2B4、pSi-2B16、pSi-2C56 和pSi-3D18对病毒抑制作用的分析 | 第120页 |
| ·关于pSi-IRES20 和pSi-3D72 对病毒无效抑制的分析 | 第120-121页 |
| 4 小结 | 第121-123页 |
| 第四章 siRNA 对乳鼠口蹄疫病毒感染的抑制 | 第123-141页 |
| 1 材料与方法 | 第124-129页 |
| ·材料 | 第124页 |
| ·方法 | 第124-129页 |
| 2 结果 | 第129-138页 |
| ·FMDV WFL 株乳鼠毒价测定结果 | 第129页 |
| ·shRNA 表达质粒单独应用对FMDV 感染乳鼠的抑制作用 | 第129-131页 |
| ·shRNA 表达质粒联合应用对FMDV 感染乳鼠的抑制作用 | 第131-133页 |
| ·提高质粒注射量对FMDV 感染乳鼠的抑制作用 | 第133-134页 |
| ·荧光定量 PCR 检测乳鼠病料中 FMDV 基因的相对表达 | 第134-135页 |
| ·不同干扰组与攻毒对照组的病理组织学分析 | 第135-138页 |
| 3 讨论 | 第138-140页 |
| ·siRNA 导入方法对病毒抑制效果的影响 | 第138-139页 |
| ·siRNA 联合应用对病毒抑制效果的影响 | 第139页 |
| ·siRNA 的剂量对病毒抑制效果的影响 | 第139-140页 |
| 4 小结 | 第140-141页 |
| 结论 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-161页 |
| 攻博期间发表的学术论文及其他成果 | 第161-162页 |
| 摘要 | 第162-165页 |
| 英文摘要 | 第165-169页 |
| 致谢 | 第169-171页 |
| 导师及作者简介 | 第171-173页 |
| CURRICULUM VITAE | 第173页 |
