中文摘要 | 第1-11页 |
ABSTRACT | 第11-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-33页 |
1 关于根结线虫的研究 | 第13-17页 |
·根结线虫的分类、形态特征及形态鉴定 | 第13-14页 |
·根结线虫的危害 | 第14-17页 |
·现状 | 第14页 |
·生活史 | 第14-15页 |
·危害机理 | 第15-17页 |
2 抗线虫基因工程研究进展 | 第17-30页 |
·抗线虫效应物 | 第18-27页 |
·蛋白酶抑制剂 | 第18-20页 |
·其他潜在的抗线虫效应物 | 第20-22页 |
·自然抗性基因(R-GENE) | 第22-25页 |
·RNAi 对基因功能的探索和潜在的抗性 | 第25-26页 |
·抗性基因的叠加 | 第26-27页 |
·基因工程防治线虫的启动子研究 | 第27-29页 |
·抗线虫效应物和组成型启动子 | 第27-28页 |
·根特异性启动子 | 第28页 |
·启动子的改造 | 第28-29页 |
·线虫取食位点的启动子和细胞的减毒作用 | 第29页 |
·生物安全性 | 第29-30页 |
·食品安全性 | 第29-30页 |
·环境安全性 | 第30页 |
3 关于黑籽南瓜的研究进展 | 第30-31页 |
4 现状分析 | 第31-32页 |
·Mi 基因抗性 | 第31页 |
·外源抗线虫基因的抗性 | 第31页 |
·诱导型根特异性启动子抗性 | 第31-32页 |
5 立题依据 | 第32-33页 |
第二章 基因克隆与载体构建 | 第33-55页 |
1 材料与方法 | 第33-44页 |
·实验材料 | 第33-34页 |
·植物材料 | 第33页 |
·酶及重要试剂 | 第33页 |
·菌株和载体 | 第33页 |
·培养基 | 第33页 |
·试剂配制 | 第33-34页 |
·实验方法 | 第34-44页 |
·启动子RKNIP 片断的克隆 | 第34-38页 |
·OCI-ΔD86 的克隆 | 第38-40页 |
·16D10-33 的克隆 | 第40-41页 |
·植物表达载体的构建 | 第41-44页 |
2 结果与分析 | 第44-53页 |
·RKNIP 启动子的克隆 | 第44-48页 |
·烟草总DNA 提取结果 | 第44页 |
·启动子RKNIP 的克隆 | 第44页 |
·RKNIP 阳性质粒的PCR 检测酶切检测 | 第44-45页 |
·测序验证与序列比对 | 第45-46页 |
·RKNIP500 启动子预测 | 第46-47页 |
·RKNIP300 序列分析 | 第47-48页 |
·OCI-ΔD86 的克隆 | 第48-49页 |
·OCI-ΔD86 的PCR 扩增结果 | 第48页 |
·酶切验证 | 第48-49页 |
·测序验证 | 第49页 |
·16D10-33 的克隆 | 第49-50页 |
·pGEM-T-RKNIP- OCIΔ86 中间载体的获得 | 第49-50页 |
·pTT33 的获得 | 第50页 |
·植物表达载体的构建结果 | 第50-53页 |
·pROR 中间载体的验证 | 第50页 |
·双元载体pRTO 的验证 | 第50-51页 |
·双元载体pRO 的验证 | 第51页 |
·pRT33 的的验证 | 第51-52页 |
·pRTOT33 双价载体的验证 | 第52-53页 |
3 讨论 | 第53-55页 |
·基因的克隆与利用 | 第53页 |
·重叠PCR 技术的应用 | 第53页 |
·关于酶切反应 | 第53-54页 |
·关于连接反应 | 第54-55页 |
第三章 OC-IΔD86 (ORYZACYSTATIN-IΔD86)基因的原核表达、活性分析及抗体制备 | 第55-63页 |
1 材料与方法 | 第55-57页 |
·实验材料 | 第55页 |
·质粒、菌株和生化试剂 | 第55页 |
·引物设计 | 第55页 |
·试验动物 | 第55页 |
·ELISA 检测试剂配制 | 第55-56页 |
·方法 | 第56-57页 |
·PCR 反应与原核表达载体的构建 | 第56页 |
·原核表达与纯化 | 第56页 |
·活性分析 | 第56页 |
·免疫注射 | 第56-57页 |
·ELISA 检测方法 | 第57页 |
2 结果与分析 | 第57-62页 |
·pet216-OC-I ΔD86 的鉴定 | 第57-58页 |
·表达分析 | 第58-59页 |
·纯化 | 第59页 |
·活性分析 | 第59-60页 |
·抗原稀释倍数的确定及二次免疫后ELISA 效价 | 第60-61页 |
·三免后ELISA 效价检测 | 第61-62页 |
3 讨论 | 第62-63页 |
·关于抗根结线虫效应物的评价及活性研究 | 第62页 |
·关于PET 载体构建策略 | 第62-63页 |
第四章 抗根结线虫植物表达载体在烟草上的遗传转化及功能研究 | 第63-72页 |
1 材料与方法 | 第63-66页 |
·植物材料 | 第63页 |
·农杆菌、质粒和生化试剂 | 第63页 |
·培养基 | 第63页 |
·方法 | 第63-66页 |
·农杆菌感受态细胞的制备 | 第63页 |
·质粒转入根癌农杆菌 | 第63-64页 |
·农杆菌培养 | 第64页 |
·侵染 | 第64页 |
·共培养 | 第64页 |
·选择培养 | 第64页 |
·生根培养 | 第64页 |
·驯化移栽 | 第64页 |
·转化植株的分子检测 | 第64-66页 |
·转基因植株的表型与功能分析 | 第66页 |
2 结果与分析 | 第66-70页 |
·转基因烟草的获得 | 第66-67页 |
·转基因烟草的分子鉴定 | 第67-70页 |
·CTAB 提取总DNA | 第67页 |
·部分植株的PCR 检测 | 第67-68页 |
·部分植株的Southern 杂交检测 | 第68页 |
·部分植株的ELISA 检测 | 第68-69页 |
·转基因烟草表达模式ELISA 检测 | 第69-70页 |
·抗根结线虫表型鉴定 | 第70页 |
3 讨论 | 第70-72页 |
·关于转基因沉默 | 第70-71页 |
·抗线虫机理 | 第71-72页 |
第五章 黑籽南瓜再生体系的建立 | 第72-83页 |
1 材料与方法 | 第72-73页 |
·植物材料 | 第72页 |
·植物激素与培养基 | 第72页 |
·方法 | 第72-73页 |
·子叶不定芽再生体系的建立 | 第72-73页 |
·成熟胚外植体不定芽再生体系的建立 | 第73页 |
2 结果与分析 | 第73-81页 |
·黑籽南瓜子叶不定芽再生体系的建立结果 | 第73-80页 |
·不定芽的再生 | 第73-74页 |
·6-BA 浓度对不定芽发生的影响 | 第74页 |
·苗龄对不定芽发生的影响 | 第74-75页 |
·IAA 浓度对不定芽发生的影响 | 第75-76页 |
·细胞分裂素的种类和浓度对不定芽发生的影响 | 第76-77页 |
·芽的伸长 | 第77页 |
·不定芽的生根和移栽 | 第77-80页 |
·黑籽南瓜成熟胚再生体系的建立结果 | 第80-81页 |
3 讨论 | 第81-83页 |
·黑籽南瓜再生体系研究优化 | 第81-83页 |
·外植体类型的选择 | 第81页 |
·子叶外植体供体苗龄对不定芽发生的影响 | 第81-82页 |
·生长素IAA 对子叶外植体不定芽发生的影响 | 第82页 |
·不同的细胞分裂素对子叶外植体不定芽发生的影响 | 第82页 |
·成熟胚外植体不定芽再生的探讨 | 第82-83页 |
结论 | 第83-84页 |
参考文献 | 第84-101页 |
附录 | 第101-104页 |
致谢 | 第104-105页 |
攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第105页 |