| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 关于根结线虫的研究 | 第13-17页 |
| ·根结线虫的分类、形态特征及形态鉴定 | 第13-14页 |
| ·根结线虫的危害 | 第14-17页 |
| ·现状 | 第14页 |
| ·生活史 | 第14-15页 |
| ·危害机理 | 第15-17页 |
| 2 抗线虫基因工程研究进展 | 第17-30页 |
| ·抗线虫效应物 | 第18-27页 |
| ·蛋白酶抑制剂 | 第18-20页 |
| ·其他潜在的抗线虫效应物 | 第20-22页 |
| ·自然抗性基因（R-GENE） | 第22-25页 |
| ·RNAi 对基因功能的探索和潜在的抗性 | 第25-26页 |
| ·抗性基因的叠加 | 第26-27页 |
| ·基因工程防治线虫的启动子研究 | 第27-29页 |
| ·抗线虫效应物和组成型启动子 | 第27-28页 |
| ·根特异性启动子 | 第28页 |
| ·启动子的改造 | 第28-29页 |
| ·线虫取食位点的启动子和细胞的减毒作用 | 第29页 |
| ·生物安全性 | 第29-30页 |
| ·食品安全性 | 第29-30页 |
| ·环境安全性 | 第30页 |
| 3 关于黑籽南瓜的研究进展 | 第30-31页 |
| 4 现状分析 | 第31-32页 |
| ·Mi 基因抗性 | 第31页 |
| ·外源抗线虫基因的抗性 | 第31页 |
| ·诱导型根特异性启动子抗性 | 第31-32页 |
| 5 立题依据 | 第32-33页 |
| 第二章 基因克隆与载体构建 | 第33-55页 |
| 1 材料与方法 | 第33-44页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·酶及重要试剂 | 第33页 |
| ·菌株和载体 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·试剂配制 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-44页 |
| ·启动子RKNIP 片断的克隆 | 第34-38页 |
| ·OCI-ΔD86 的克隆 | 第38-40页 |
| ·16D10-33 的克隆 | 第40-41页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-53页 |
| ·RKNIP 启动子的克隆 | 第44-48页 |
| ·烟草总DNA 提取结果 | 第44页 |
| ·启动子RKNIP 的克隆 | 第44页 |
| ·RKNIP 阳性质粒的PCR 检测酶切检测 | 第44-45页 |
| ·测序验证与序列比对 | 第45-46页 |
| ·RKNIP500 启动子预测 | 第46-47页 |
| ·RKNIP300 序列分析 | 第47-48页 |
| ·OCI-ΔD86 的克隆 | 第48-49页 |
| ·OCI-ΔD86 的PCR 扩增结果 | 第48页 |
| ·酶切验证 | 第48-49页 |
| ·测序验证 | 第49页 |
| ·16D10-33 的克隆 | 第49-50页 |
| ·pGEM-T-RKNIP- OCIΔ86 中间载体的获得 | 第49-50页 |
| ·pTT33 的获得 | 第50页 |
| ·植物表达载体的构建结果 | 第50-53页 |
| ·pROR 中间载体的验证 | 第50页 |
| ·双元载体pRTO 的验证 | 第50-51页 |
| ·双元载体pRO 的验证 | 第51页 |
| ·pRT33 的的验证 | 第51-52页 |
| ·pRTOT33 双价载体的验证 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| ·基因的克隆与利用 | 第53页 |
| ·重叠PCR 技术的应用 | 第53页 |
| ·关于酶切反应 | 第53-54页 |
| ·关于连接反应 | 第54-55页 |
| 第三章 OC-IΔD86 (ORYZACYSTATIN-IΔD86)基因的原核表达、活性分析及抗体制备 | 第55-63页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·质粒、菌株和生化试剂 | 第55页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·试验动物 | 第55页 |
| ·ELISA 检测试剂配制 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-57页 |
| ·PCR 反应与原核表达载体的构建 | 第56页 |
| ·原核表达与纯化 | 第56页 |
| ·活性分析 | 第56页 |
| ·免疫注射 | 第56-57页 |
| ·ELISA 检测方法 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-62页 |
| ·pet216-OC-I ΔD86 的鉴定 | 第57-58页 |
| ·表达分析 | 第58-59页 |
| ·纯化 | 第59页 |
| ·活性分析 | 第59-60页 |
| ·抗原稀释倍数的确定及二次免疫后ELISA 效价 | 第60-61页 |
| ·三免后ELISA 效价检测 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| ·关于抗根结线虫效应物的评价及活性研究 | 第62页 |
| ·关于PET 载体构建策略 | 第62-63页 |
| 第四章 抗根结线虫植物表达载体在烟草上的遗传转化及功能研究 | 第63-72页 |
| 1 材料与方法 | 第63-66页 |
| ·植物材料 | 第63页 |
| ·农杆菌、质粒和生化试剂 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第63页 |
| ·质粒转入根癌农杆菌 | 第63-64页 |
| ·农杆菌培养 | 第64页 |
| ·侵染 | 第64页 |
| ·共培养 | 第64页 |
| ·选择培养 | 第64页 |
| ·生根培养 | 第64页 |
| ·驯化移栽 | 第64页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第64-66页 |
| ·转基因植株的表型与功能分析 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-70页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第66-67页 |
| ·转基因烟草的分子鉴定 | 第67-70页 |
| ·CTAB 提取总DNA | 第67页 |
| ·部分植株的PCR 检测 | 第67-68页 |
| ·部分植株的Southern 杂交检测 | 第68页 |
| ·部分植株的ELISA 检测 | 第68-69页 |
| ·转基因烟草表达模式ELISA 检测 | 第69-70页 |
| ·抗根结线虫表型鉴定 | 第70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| ·关于转基因沉默 | 第70-71页 |
| ·抗线虫机理 | 第71-72页 |
| 第五章 黑籽南瓜再生体系的建立 | 第72-83页 |
| 1 材料与方法 | 第72-73页 |
| ·植物材料 | 第72页 |
| ·植物激素与培养基 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-73页 |
| ·子叶不定芽再生体系的建立 | 第72-73页 |
| ·成熟胚外植体不定芽再生体系的建立 | 第73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-81页 |
| ·黑籽南瓜子叶不定芽再生体系的建立结果 | 第73-80页 |
| ·不定芽的再生 | 第73-74页 |
| ·6-BA 浓度对不定芽发生的影响 | 第74页 |
| ·苗龄对不定芽发生的影响 | 第74-75页 |
| ·IAA 浓度对不定芽发生的影响 | 第75-76页 |
| ·细胞分裂素的种类和浓度对不定芽发生的影响 | 第76-77页 |
| ·芽的伸长 | 第77页 |
| ·不定芽的生根和移栽 | 第77-80页 |
| ·黑籽南瓜成熟胚再生体系的建立结果 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| ·黑籽南瓜再生体系研究优化 | 第81-83页 |
| ·外植体类型的选择 | 第81页 |
| ·子叶外植体供体苗龄对不定芽发生的影响 | 第81-82页 |
| ·生长素IAA 对子叶外植体不定芽发生的影响 | 第82页 |
| ·不同的细胞分裂素对子叶外植体不定芽发生的影响 | 第82页 |
| ·成熟胚外植体不定芽再生的探讨 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-101页 |
| 附录 | 第101-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第105页 |
