| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11-39页 |
| 第一章 PRRS研究进展 | 第11-31页 |
| 1 病毒的分类地位与一般理化特性 | 第11-13页 |
| 2 病毒的分子生物学特性 | 第13-18页 |
| ·PRRSV的基因组结构 | 第13-14页 |
| ·PRRSV的基因组转录和表达 | 第14页 |
| ·病毒蛋白 | 第14-18页 |
| 3 PRRSV的免疫特性 | 第18-20页 |
| ·对免疫细胞的影响 | 第19页 |
| ·体液免疫 | 第19-20页 |
| ·细胞免疫 | 第20页 |
| 4 PRRSV疫苗发展概况 | 第20-24页 |
| ·传统疫苗 | 第21页 |
| ·PRRS新型疫苗研究进展 | 第21-24页 |
| 参考文献 | 第24-31页 |
| 第二章 T细胞表位研究进展 | 第31-39页 |
| 1.T细胞表位的研究方法 | 第32-33页 |
| 2.CD4~+细胞表位的确定 | 第33-34页 |
| ·表位的初步定位 | 第33-34页 |
| ·表位筛选中候选肽段的合成 | 第34页 |
| ·表位筛选中效应细胞的选择 | 第34页 |
| 3 细胞表位多肽活性的检测方法 | 第34-37页 |
| ·T淋巴细胞增殖试验 | 第35页 |
| ·四聚体技术 | 第35-36页 |
| ·胞内细胞因子染色 | 第36页 |
| ·ELISPOT | 第36页 |
| ·MTT还原法 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-39页 |
| 第二篇 研究内容 | 第39-84页 |
| 第三章 PRRSV江苏株M蛋白的基因的克隆与序列分析 | 第39-53页 |
| 1.材料与方法 | 第39-45页 |
| ·病毒、细胞、菌种及载体 | 第39-40页 |
| ·主要试剂及配制 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·PRRSV总RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR扩增ORF6 | 第42页 |
| ·PCR产物回收 | 第42-43页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第43页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·转化 | 第44页 |
| ·重组质粒pMD18-T的小量提取和酶切测序 | 第44-45页 |
| ·重组质粒DNA测序与分析 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第45页 |
| ·重组阳性质粒PMD-ORF6的鉴定 | 第45-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 第四章 PRSSVM基因的截短、分段与原核表达 | 第53-75页 |
| 1.材料与方法 | 第53-60页 |
| ·菌种及载体 | 第53页 |
| ·试剂及配制 | 第53-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·pET-M1、K1、K2、K3、K4的构建 | 第56-58页 |
| ·蛋白的表达 | 第58页 |
| ·目的蛋白SDS-PAGE电泳 | 第58页 |
| ·表达产物的Western-bLot实验 | 第58-59页 |
| ·蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-67页 |
| ·M基因的截断和扩增 | 第60-62页 |
| ·重组阳性质粒pET-M1、K1、K2、K3、K4的鉴定 | 第62-64页 |
| ·重组蛋白M1、K1、K2、K3、K4在大肠杆菌中的大量表达 | 第64-66页 |
| ·Western blot鉴定结果 | 第66页 |
| ·蛋白M1、Kl、K2、K3、K4的纯化结果 | 第66-67页 |
| 3.讨论 | 第67-71页 |
| ·M蛋白的截短及分段 | 第67页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第67-69页 |
| ·表达载体及宿主菌的选择 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 第五章 PRSSVM蛋白CD4~+T细胞表位的初步鉴定 | 第75-84页 |
| 1.材料与方法 | 第75-78页 |
| ·病毒、细胞、实验动物 | 第75-76页 |
| ·主要试剂及配制 | 第76页 |
| ·动物的分组免疫 | 第76页 |
| ·细胞中和实验 | 第76-77页 |
| ·流式细胞仪检测细胞因子IFN-γ水平 | 第77-78页 |
| 2 结果 | 第78-81页 |
| ·病毒的培养 | 第78-79页 |
| ·病毒毒价的确定(细胞培养半数感染量TCID_(50)滴定) | 第79页 |
| ·抗PRRSV中和抗体的测定 | 第79页 |
| ·免疫小鼠脾脏淋巴细胞体外刺激细胞因子IFN-γ分泌检测结果 | 第79-81页 |
| 3 讨论 | 第81-84页 |
| ·T细胞表为鉴定的意义 | 第81-82页 |
| ·M1蛋白各段诱导IFN-γ的产生 | 第82-83页 |
| ·M1蛋白诱导中和抗体的产生 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 全文总结 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 学位期间发表的论文 | 第91页 |
