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猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离、鉴定及ORF5基因的克隆及变异分析

致谢第1-8页
摘要第8-9页
Abstract第9-10页
1. 文献综述第10-25页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的特性第10-14页
     ·病毒的分类及理化性质第10-11页
     ·抗原性第11-12页
     ·PRRSV 的体外生长特性第12页
     ·致病机制第12-13页
     ·流行病学第13-14页
   ·PRRSV 分子生物学研究进展第14-21页
     ·基因组结构与功能第14-15页
     ·蛋白质第15-20页
       ·聚合酶第16页
       ·主要结构蛋白第16-19页
       ·次要结构蛋白第19-20页
     ·PRRSV 基因组的变异第20页
     ·生物学和抗原性变异第20-21页
   ·PRRS 诊断方法研究进展第21-25页
     ·病原学诊断第22-24页
       ·PRRSV 的分离第22-23页
       ·抗原检测第23页
       ·病毒核酸的检测第23-24页
     ·血清学诊断第24-25页
       ·免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)第24页
       ·间接免疫荧光试验(IFA)第24-25页
       ·酶联免疫吸附试验(ELISA)第25页
       ·血清中和试验(SNT)第25页
2. 引言第25-26页
3 实验材料与方法第26-31页
   ·实验材料第26-27页
     ·细胞第26页
     ·血清第26页
     ·菌种与质粒第26页
     ·主要药品与试剂第26页
     ·主要培养基第26-27页
     ·细胞消化液第27页
     ·实验中所使的引物第27页
     ·实验所用缓冲液第27页
       ·质粒提取用缓冲液第27页
       ·其他缓冲液第27页
   ·实验方法第27-31页
     ·病料采集与处理第27页
     ·细胞的培养第27-28页
     ·病毒的分离第28页
     ·TCID50 的测定第28页
     ·中和试验第28页
     ·PRRSV 基因组 RNA 的提取第28-29页
     ·RT-PCR 扩增与检测第29页
     ·RT-PCR 产物的回收与纯化第29页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第29-30页
     ·回收产物的连接第30页
     ·连接产物的转化第30页
     ·质粒的制备第30-31页
       ·质粒的小量制备第30页
       ·质粒的大量制备第30-31页
     ·阳性克隆质粒的鉴定及其序列的测定与分析第31页
4. 结果与分析第31-36页
   ·病料接种细胞后的细胞病变第31-32页
   ·所分离病毒的 TCID50测定结果第32页
   ·中和试验结果第32页
   ·PCR 鉴定结果第32页
   ·PRRSV HN-Y 株 ORF5 基因的扩增与克隆第32-33页
   ·ORF5 基因核苷酸序列测定第33-34页
   ·序列比较第34-35页
   ·系统发育树分析第35页
   ·疏水性、糖基化位点和抗原性分析第35-36页
5. 结论与讨论第36-39页
   ·PRRSV ORF5 基因的遗传变异第36-37页
   ·GP5 信号肽的预测第37-38页
   ·GP5 的抗原漂移第38-39页
参考文献第39-48页

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