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蓖麻成熟期胚抑制消减cDNA文库构建及其差异表达基因分析

目录第1-7页
摘要第7-8页
ABSTRACT第8-10页
缩略语表第10-11页
1 引言第11-17页
   ·植物脂肪酸代谢的研究概况第11-12页
   ·抑制性消减杂交技术产生的背景第12-13页
   ·抑制性消减杂交技术的主要原理第13页
   ·抑制性消减杂交技术的基本过程第13-15页
   ·抑制性消减杂交技术的主要优缺点第15-16页
     ·抑制性消减杂交技术的主要优点第15页
     ·抑制性消减杂交技术的主要缺点第15-16页
   ·抑制性消减杂交技术的应用第16页
   ·研究的目的与意义第16-17页
2 材料与方法第17-34页
   ·材料第17页
     ·植物材料第17页
     ·菌株第17页
     ·主要化学试剂第17页
     ·主要仪器设备第17页
   ·方法第17-34页
     ·材料的培养第17-18页
     ·材料的标记第18-19页
     ·取材第19页
       ·胚的取材第19页
       ·组织的取材第19页
     ·总RNA的提取第19-20页
     ·mRNA的纯化第20页
     ·RNA的反转录第20-23页
       ·第一链cDNA合成第21-22页
       ·第二链cDNA合成第22-23页
     ·抑制性消减杂交第23-29页
       ·Driver cDNA和Tester cDNA的制备第23-24页
       ·接头连接第24-25页
       ·连接分析第25-26页
       ·第一次杂交第26-27页
       ·第二次杂交第27页
       ·第一轮PCR第27-28页
       ·第二轮PCR第28页
       ·消减杂交效率检测第28-29页
     ·连接转化第29-30页
     ·克隆涂板第30页
     ·菌液PCR筛选第30-31页
     ·点杂交第31-32页
       ·探针制备第31-32页
       ·点膜、烤膜及显色第32页
     ·克隆测序及分析第32-33页
     ·RT-PCR检测差异表达基因在不同组织中的表达情况第33-34页
3 结果与分析第34-46页
   ·材料的培养第34-35页
   ·总RNA的提取第35-37页
     ·构建抑制性消减杂交cDNA文库的总RNA提取第35页
     ·检测蓖麻不同组织的总RNA提取第35-36页
     ·检测蓖麻胚不同发育时期的总RNA提取第36-37页
   ·用于特异性检测的样品的反转录第37-38页
     ·蓖麻不同组织RNA模板反转录检测第37页
     ·蓖麻胚不同发育时期RNA模板反转录检测第37-38页
   ·消减杂交文库构建第38-40页
     ·接头连接效率分析第38-39页
     ·消减杂交效率的PCR检测第39-40页
   ·PCR检测克隆片段插入状况第40-41页
   ·阳性克隆的点杂交筛选第41页
   ·测序结果统计第41-42页
   ·差异表达基因信息第42-44页
   ·差异基因的RT-PCR检测第44-46页
     ·差异基因的组织特异性检测第44-45页
     ·差异基因的时序特异性检测第45-46页
4 讨论第46-51页
   ·培养材料和取材上的分析第46-47页
     ·培养方法的改进第46-47页
     ·取材的改进第47页
   ·差异表达基因功能分析第47-51页
     ·脂肪酸代谢调控基因第48页
     ·蛋白质合成调控基因第48-49页
     ·糖类的合成降解调控基因第49-50页
     ·其他差异表达基因第50-51页
   ·展望和意义第51页
5 结论第51-52页
参考文献第52-60页
致谢第60-61页
附录一 常用溶液配方第61-63页
附录二 接头与引物第63-64页
附录三 研究生在读期间发表的文章第64页

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