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高寒藏药材麻花艽及其体细胞杂种齐墩果酸合成关键酶-β-amyrin合成酶基因克隆及其功能鉴定

中文摘要第1-13页
Abstract第13-20页
符号说明第20-22页
第一章 文献综述第22-56页
 1 植物次生代谢研究进展第22-38页
   ·次生代谢产物种类及代谢途径基因调控第22-26页
   ·植物次生代谢工程第26-27页
   ·萜类研究进展第27-38页
 2 诱导子在植物次生代谢产物调控及生物合成中的研究进展第38-44页
   ·诱导子的分类第38-39页
   ·诱导子的作用方式第39-44页
 3 植物体细胞杂交研究进展第44-49页
   ·植物体细胞杂交研究概况第45-46页
   ·体细胞杂种重要性状的转移第46-48页
   ·体细胞杂交技术在药用植物中的研究进展第48-49页
 4 麻花艽研究进展第49-54页
   ·麻花艽(Gstraminea Maxim)的植物学及草本研究第50-51页
   ·齐墩果酸的药理作用第51-53页
   ·药效化学成分测定和含量分析的方法第53-54页
 5 研究背景及立题意义第54-56页
第二章 麻花艽及其体细胞杂种齐墩果酸合成关键酶β-amyrin合成酶基因的克隆及序列分析第56-107页
 1 材料与方法第56-67页
   ·材料、试剂及培养基第56-58页
   ·总RNA的提取及纯化检测第58-59页
   ·β-amyrin合成酶基因GsAS1和GsAS2的扩增第59-63页
   ·目的片段切胶回收第63-64页
   ·回收片段的连接第64页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化第64-65页
   ·阳性质粒筛选第65-66页
   ·测序第66页
   ·核苷酸及蛋白质序列比对分析第66-67页
 2 结果与分析第67-104页
   ·麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS1和GsAS2的克隆及序列分析第67-77页
   ·狭叶柴胡中β-amyrin合成酶基因BsAS的克隆及序列分析第77-80页
   ·狭叶柴胡与麻花艽体细胞杂种中β-amyrin合成酶基因全长cDNA克隆及序列分析第80-93页
   ·狭叶柴胡、麻花艽及其杂种中β-amyrin合成酶基因的序列同源性比较第93-101页
   ·狭叶柴胡、麻花艽和杂种中β-amyrin合成酶基因的进化树分析第101-103页
   ·狭叶柴胡和麻花艽中β-amyrin合成酶基因的相互关系第103页
   ·体细胞杂种中GsAS1和GsAS2的核苷酸序列变化研究第103-104页
 3 讨论第104-107页
   ·麻花艽及其体细胞杂种中齐墩果酸合成关键酶基因的克隆及序列分析第104-105页
   ·β-amyrin合成酶基因在麻花艽体细胞杂种中的存在方式及其等位变异第105-107页
第三章 麻花艽及其体细胞杂种中齐墩果酸合成相关基因的表达分析第107-128页
 1 材料和方法第107-112页
   ·实验材料第107页
   ·试剂第107页
   ·RNA提取和纯化第107页
   ·HPLC样品制备第107-108页
   ·半定量RT-PCR第108-110页
   ·Real-time PCR第110-112页
 2 结果与分析第112-125页
   ·麻花艽三萜代谢途径中相关基因片段的克隆第112-118页
   ·齐墩果酸代谢途径中相关基因的表达分析第118-124页
   ·水杨酸诱导下齐墩果酸代谢途径中相关基因表达分析第124-125页
 3 讨论第125-128页
   ·齐墩果酸代谢途径中各关键酶基因组织特异性表达研究第126页
   ·杂种齐墩果酸合成相关基因的表达模式及与齐墩果酸含量的关系第126-127页
   ·MeJA对齐墩果酸合成相关基因表达及其齐墩果酸含量的影响第127-128页
第四章 麻花艽中β-amyrin合成酶基因的功能分析第128-169页
 1 材料和方法第128-147页
   ·GsAS1和GsAS2基因的原核表达第128-131页
   ·GsAS1和GsAS2基因的真核表达第131-138页
   ·使用Gateway技术构建GsAS1和GsAS2植物的过表达载体第138-142页
   ·使用Gateway技术构建GsAS1和GsAS2的RNAi表达载体第142-144页
   ·基因枪法转化麻花艽愈伤组织第144-147页
 2 结果与分析第147-167页
   ·GsAS1和GsAS2的原核表达分析第147-151页
   ·GsAS1和GsAS2的真核表达分析第151-157页
   ·利用Gateway方法进行GsAS1和GsAS2的过表达载体构建第157-158页
   ·利用Gateway方法进行GsAS1和GsAS2的RNAi载体构建第158-160页
   ·GsAS1过表达载体和RNAi载体转化麻花艽愈伤组织第160-163页
   ·GsAS2过表达载体和RNAi载体转化麻花艽愈伤组织第163-167页
 3 讨论第167-169页
   ·麻花艽齐墩果酸合成关键酶——β-amyrin合成酶基因的性质第167页
   ·麻花艽齐墩果酸合成关键酶——β-amyrin合成酶基因对麻花艽胚性愈伤组织的转化第167-169页
第五章 中药材干植株材料化学成分研究第169-174页
 1 材料与方法第169-170页
   ·材料第169页
   ·仪器第169页
   ·分析条件第169-170页
   ·实验方法第170页
 2 结果与分析第170-172页
   ·水母雪兔子和盐地风毛菊的GC-MS分析第170页
   ·水母雪兔子和盐地风毛菊挥发性化学成份分析第170-172页
 3 讨论第172-174页
论文创新点第174-175页
参考文献第175-193页
研究生期间发表论文情况第193-194页
致谢第194页

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