| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 细胞永生化概述 | 第13-37页 |
| ·细胞的衰老与死亡 | 第13-17页 |
| ·细胞衰老 | 第13页 |
| ·危机 | 第13页 |
| ·端粒 | 第13-17页 |
| ·细胞永生化 | 第17-28页 |
| ·细胞永生化的分子机制 | 第18-22页 |
| ·诱导细胞永生化方法 | 第22-25页 |
| ·应用前景与局限性 | 第25-28页 |
| ·端粒酶与细胞永生化 | 第28-36页 |
| ·端粒酶的结构 | 第28-29页 |
| ·端粒酶的功能 | 第29-33页 |
| ·端粒酶诱导细胞永生化 | 第33-36页 |
| ·展望 | 第36-37页 |
| 第二章 转基因动物研究进展 | 第37-55页 |
| ·转基因动物研究进展 | 第37-39页 |
| ·转基因动物研究背景 | 第37页 |
| ·转基因动物研究进展 | 第37-39页 |
| ·转基因动物生产方法 | 第39-48页 |
| ·显微注射法 | 第39-40页 |
| ·精子载体法 | 第40-41页 |
| ·细胞介导法 | 第41-42页 |
| ·体细胞核移植 | 第42-43页 |
| ·逆转录病毒载体法 | 第43-44页 |
| ·人工染色体法 | 第44-45页 |
| ·性腺转基因技术 | 第45-46页 |
| ·基因打靶技术 | 第46-47页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第47-48页 |
| ·转基因动物应用领域 | 第48-53页 |
| ·转基因动物在生物制药领域的应用 | 第48-49页 |
| ·转基因动物技术在动物育种领域的应用 | 第49-50页 |
| ·建立动物模型 | 第50-51页 |
| ·建立动物生物反应器 | 第51-52页 |
| ·生产生物材料 | 第52页 |
| ·生产适于移植的动物器官 | 第52-53页 |
| ·转基因动物存在的问题 | 第53-55页 |
| ·转基因动物成功率 | 第53-54页 |
| ·外源基因稳定性 | 第54页 |
| ·生物安全 | 第54-55页 |
| 第三章 荷斯坦牛胎儿成纤维细胞培养与 hTERT 基因转染 | 第55-68页 |
| ·材料方法 | 第55-56页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56页 |
| ·pCI-neo-hTERT 真核表达载体的鉴定 | 第56-60页 |
| ·酶切鉴定 | 第56-58页 |
| ·hTERT 基因测序鉴定 | 第58-60页 |
| ·胎儿成纤维细胞的原代与传代培养 | 第60页 |
| ·胎儿成纤维细胞的原代培养 | 第60页 |
| ·胎儿成纤维细胞的传代培养 | 第60页 |
| ·细胞转染 | 第60-62页 |
| ·质粒提取 | 第60-61页 |
| ·浓度及纯度的检测 | 第61页 |
| ·转染方法 | 第61-62页 |
| ·初筛 | 第62-63页 |
| ·最佳筛选浓度 | 第62页 |
| ·阳性克隆的获得与转移 | 第62-63页 |
| ·转染细胞扩大培养及保存 | 第63-64页 |
| ·转染细胞扩大培养 | 第63页 |
| ·复筛 | 第63页 |
| ·转染细胞保存 | 第63-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-66页 |
| ·质粒图谱及酶切结果 | 第64页 |
| ·hTERT 基因测序结果 | 第64页 |
| ·G418 最佳筛选浓度的确定 | 第64-65页 |
| ·胎儿及原代、传代细胞培养图片 | 第65-66页 |
| ·细胞筛选结果 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第四章 转染hTERT基因的牛胎儿成纤维细胞的生物学特征分析 | 第68-79页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第68页 |
| ·主要仪器 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-73页 |
| ·转染细胞RT-PCR 检测方法 | 第68-71页 |
| ·细胞周期检测方法 | 第71-72页 |
| ·细胞凋亡检测方法 | 第72页 |
| ·倍性分析检测方法 | 第72-73页 |
| ·数据分析 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-77页 |
| ·阳性细胞生长状态的观察 | 第73页 |
| ·转染细胞RT-PCR 检测结果 | 第73-75页 |
| ·转染细胞周期检测结果 | 第75页 |
| ·转染细胞凋亡检测结果 | 第75-76页 |
| ·转染细胞倍性分析结果 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-78页 |
| ·小结 | 第78-79页 |
| 第五章 转染 hTERT 基因的牛胎儿成纤维细胞作为核 移植供体的研究 | 第79-86页 |
| ·材料方法 | 第79-82页 |
| ·试剂与仪器 | 第79页 |
| ·显微注射用针的制备 | 第79-80页 |
| ·供体细胞的准备 | 第80-81页 |
| ·卵母细胞成熟 | 第81页 |
| ·卵母细胞去核 | 第81页 |
| ·重构胚的构建与体外培养 | 第81-82页 |
| ·数据统计 | 第82页 |
| ·结果 | 第82-84页 |
| ·重构胚体外发育率 | 第82-83页 |
| ·不同供体细胞重构胚发育比较 | 第83-84页 |
| ·讨论与分析 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 个人简介 | 第102页 |
