| 第一章 H5N1亚型高致病性禽流感病毒siRNA靶向制剂的研究 | 第1-63页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| ·前言 | 第11-28页 |
| ·人禽流感的历史与现状 | 第11-12页 |
| ·H5N1亚型流感病毒的病原学基础 | 第12-19页 |
| ·流感病毒的分类与基因组结构 | 第12-15页 |
| ·流感病毒的复制 | 第15-16页 |
| ·H5N1亚型禽流感病毒的流行病学新特点 | 第16-17页 |
| ·禽流感病毒的种间传播机制 | 第17-19页 |
| ·H5N1亚型禽流感病毒的致病机理 | 第19-22页 |
| ·人H5N1禽流感的临床和病理表现 | 第19页 |
| ·血凝素与致病性关系 | 第19-20页 |
| ·神经氨酸酶与致病性的关系 | 第20页 |
| ·聚合酶与致病性的关系 | 第20-21页 |
| ·NS1蛋白与流感病毒致病性 | 第21-22页 |
| ·H5N1禽流感救治药物研究进展 | 第22-28页 |
| ·离子通道抑制剂 | 第23-24页 |
| ·神经氨酸酶抑制剂 | 第24页 |
| ·反义寡核苷酸 | 第24-25页 |
| ·RNA干扰 | 第25页 |
| ·治疗性抗体 | 第25-26页 |
| ·靶向制剂 | 第26-28页 |
| ·材料和方法 | 第28-42页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·病毒、细胞、菌株和实验动物 | 第28页 |
| ·质粒及主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-42页 |
| ·PET28a-ScFv-Tail质粒的构建及重组蛋白ScFv-Tail的表达和活性鉴定 | 第31-34页 |
| ·PET28a-ScFv-Tail质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白ScFv-Tail的表达、纯化和复性 | 第32-34页 |
| ·复性的重组蛋白ScFv-Tail的活性检测 | 第34页 |
| ·共表达三个siRNA质粒的构建 | 第34-37页 |
| ·不同N/P比对MDCK细胞生长(MTT)和转染效率的影响 | 第37页 |
| ·凝胶迁移阻滞实验 | 第37-38页 |
| ·靶向制剂的转染 | 第38页 |
| ·靶向制剂对流感病毒在MDCK细胞中复制的抑制作用 | 第38-41页 |
| ·靶向制剂对H5N1亚型高致病性禽流感病毒在小鼠肺内复制的抑制作用 | 第41页 |
| ·靶向制剂对H5N1亚型高致病性禽流感病毒攻毒小鼠的保护作用 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-55页 |
| ·重组质粒PET28a-ScFv-Tail的鉴定结果 | 第42页 |
| ·重组蛋白ScFv-Tail的表达、纯化和复性 | 第42-44页 |
| ·复性的重组蛋白活性检测——IFA | 第44页 |
| ·共表达三个siRNA质粒的构建 | 第44-46页 |
| ·不同PEI与质粒的N/P比对MDCK细胞生长(MTT)和转染效率的影响 | 第46-47页 |
| ·凝胶阻滞实验鉴定靶向制剂结合性 | 第47页 |
| ·靶向制剂的转染 | 第47-49页 |
| ·靶向制剂抑制流感病毒在MDCK细胞中的复制 | 第49-52页 |
| ·靶向制剂对H5N1亚型高致病性禽流感病毒在小鼠肺内复制的抑制作用 | 第52-53页 |
| ·靶向制剂对H5N1亚型高致病性禽流感病毒攻毒小鼠的保护作用 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-62页 |
| ·重组蛋白ScFv-Tail的原核表达 | 第55-56页 |
| ·聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的核酸转染和释放 | 第56-58页 |
| ·具有靶向性的siRNA/DNA传递体系的构建 | 第58-59页 |
| ·问题与展望 | 第59-62页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| 第二章 PA基因特异性siRNA抑制H5N1亚型高致病性禽流感病毒复制的研究 | 第63-91页 |
| 中文摘要 | 第63-64页 |
| 英文摘要 | 第64-65页 |
| ·前言 | 第65-72页 |
| ·RNAi现象的发现 | 第65-66页 |
| ·RNAi的作用原理 | 第66-68页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第68页 |
| ·RNAi在抗病毒研究中的应用 | 第68-69页 |
| ·RNAi技术在抗病毒过程中存在的问题与展望 | 第69-72页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·病毒与细胞 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·实验动物 | 第72页 |
| ·溶液配制 | 第72-73页 |
| ·干扰RNA寡核苷酸链的设计和合成 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-78页 |
| ·H5N1亚型高致病性禽流感病毒PA基因RNAi靶序列的设计与表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·siRNA对H5N1亚型流感病毒体外复制的影响 | 第75-77页 |
| ·siRNA对H5N1亚型流感病毒在MDCK细胞内复制的影响(TCID_(50)) | 第75-76页 |
| ·病毒TCID_(50)的测定 | 第76页 |
| ·反转录(RT)和实时定量PCR(Real-time PCR)检测siRNA对H5N1亚型流感病毒复制的影响 | 第76-77页 |
| ·间接免疫荧光实验(IFA)检测siRNA对H5N1亚型流感病毒蛋白的影响 | 第77页 |
| ·siRNA对H5N1亚型高致病性禽流感病毒体内复制的影响 | 第77-78页 |
| ·siRNA对H5N1亚型高致病性禽流感病毒攻毒小鼠的保护作用 | 第78页 |
| ·实验结果 | 第78-85页 |
| ·PA基因的siRNA靶序列的设计与表达载体的构建 | 第78-80页 |
| ·siRNA对H5N1亚型流感病毒在MDCK细胞中病毒滴度的影响 | 第80-81页 |
| ·Real-time PCR检测siRNA对PA基因mRNA、vRNA和cRNA的抑制作用 | 第81-82页 |
| ·间接免疫荧光实验(IFA)检测siRNA对H5N1亚型流感病毒蛋白表达的抑制 | 第82-83页 |
| ·siRNA(ps-PA496)对H5N1亚型高致病性禽流感病毒在小鼠肺中复制的抑制作用 | 第83-84页 |
| ·siRNA(ps-PA496)对H5N1亚型高致病性禽流感病毒攻毒小鼠的保护作用 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-90页 |
| ·siRNA的设计 | 第85-86页 |
| ·PA基因作为流感病毒RNA干扰的靶基因的意义 | 第86-88页 |
| ·聚乙烯亚胺介导的siRNA转染 | 第88-89页 |
| ·RNAi在抗病毒研究中的应用前景 | 第89-90页 |
| ·结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 附录 | 第103-104页 |
| 缩略词 | 第104-106页 |
| 个人简历 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
