| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1 黄酮类化合物的基本概况 | 第13-14页 |
| ·植物中的黄酮类化合物 | 第13页 |
| ·黄酮类化合物功能 | 第13-14页 |
| 2 金银花中黄酮类化合物的种类及分布 | 第14页 |
| 3 黄酮类化合物代谢途径 | 第14-15页 |
| 4 查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS) | 第15-19页 |
| ·CHS的特征 | 第16页 |
| ·chs基因的结构 | 第16页 |
| ·chs基因的进化 | 第16-17页 |
| ·chs基因的表达调控 | 第17-18页 |
| ·chs的转基因应用 | 第18-19页 |
| 5 查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI) | 第19-21页 |
| ·CHI的基本概况 | 第19页 |
| ·CHI的催化反应机理 | 第19-20页 |
| ·CHI在基因工程中的应用 | 第20-21页 |
| ·CHI的基因克隆 | 第21页 |
| 6 黄酮醇合成酶(flavonol synthase,FLS) | 第21-22页 |
| 7 植物基因克隆技术 | 第22-24页 |
| ·序列克隆 | 第22页 |
| ·功能克隆 | 第22-23页 |
| ·定位克隆 | 第23页 |
| ·表型克隆 | 第23-24页 |
| ·cDNA末端快速克隆技术 | 第24页 |
| 8 立题依据和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 金银花chs基因全长cDNA序列克隆 | 第26-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·仪器与试剂 | 第26页 |
| ·试剂盒、酶和Maker | 第26页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第26页 |
| ·实验用品与耗材 | 第26-27页 |
| ·引物合成与测序 | 第27页 |
| 2 试验方法 | 第27-36页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取及纯化 | 第27-28页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取 | 第27页 |
| ·金银花叶片总RNA的纯化 | 第27-28页 |
| ·金银花叶片RNA含量及浓度测定 | 第28页 |
| ·金银花叶片CHS基因保守区克隆 | 第28-31页 |
| ·cDNA的合成 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·保守区cDNA的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第30页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第30-31页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第30-31页 |
| ·转化及鉴定 | 第31页 |
| ·3'RACE | 第31-34页 |
| ·5'RACE | 第34-36页 |
| 3 结果和分析 | 第36-42页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取与纯度检测 | 第36页 |
| ·金银花叶片chs基因cDNA保守区的扩增结果 | 第36-37页 |
| ·金银花叶片chs基因cDNA的RACE及序列分析 | 第37-40页 |
| ·金银花叶片chs基因cDNA全长的获得 | 第40-41页 |
| ·金银花叶片chs基因cDNA可阅读框(ORF)扩增 | 第41-42页 |
| 4 生物信息学分析 | 第42-48页 |
| ·金银花叶片chs基因cDNA序列同源性分析 | 第42-43页 |
| ·金银花叶片CHS蛋白序列分析 | 第43-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 金银花fls基因cDNA全长克隆 | 第50-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第50页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·仪器与试剂 | 第50页 |
| ·试剂盒、酶和Maker | 第50页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第50页 |
| ·实验用具与耗材 | 第50页 |
| ·引物合成与测序 | 第50页 |
| 2 试验方法 | 第50-54页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取及纯化 | 第50-51页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取 | 第50页 |
| ·金银花叶片总RNA的纯化 | 第50-51页 |
| ·金银花叶片RNA含量及浓度测定 | 第51页 |
| ·金银花叶片fls基因保守区的克隆 | 第51-52页 |
| ·cDNA的合成 | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·保守区cDNA的PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第52页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第52页 |
| ·3'RACE | 第52-53页 |
| ·3’RACE引物设计 | 第52页 |
| ·3’RACE Ready cDNA的合成 | 第52页 |
| ·3’末端的PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第53页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第53页 |
| ·5'RACE | 第53-54页 |
| ·5’RACE引物设计 | 第53页 |
| ·5’RACE Ready cDNA的合成 | 第53页 |
| ·5’末端的PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第54页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第54页 |
| 3 结果和分析 | 第54-60页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取与纯度检测 | 第54页 |
| ·金银花叶片fls基因cDNA保守区的扩增结果 | 第54-55页 |
| ·金银花叶片fls基因cDNA的RACE及序列分析 | 第55-57页 |
| ·金银花叶片fls基因cDNA的3'RACE | 第55-56页 |
| ·金银花叶片fls基因cDNA的5'RACE扩增 | 第56-57页 |
| ·金银花叶片fls基因全长cDNA序列的获得 | 第57-58页 |
| ·金银花叶片fls基因cDNA可阅读框(ORF)扩增 | 第58-60页 |
| 4 生物信息学分析 | 第60-67页 |
| ·金银花叶片fls基因cDNA序列同源性分析 | 第60页 |
| ·金银花叶片FLS蛋白序列分析 | 第60-67页 |
| ·金银花叶片FLS氨基酸及亲水性分析 | 第60-62页 |
| ·金银花叶片fls基因氨基酸编码产物同源性分析 | 第62-66页 |
| ·金银花叶片FLS蛋白质跨膜区结构及二级结构的预测 | 第66-67页 |
| 5 讨论 | 第67-68页 |
| 第四章 金银花chi基因cDNA全长克隆 | 第68-78页 |
| 1 材料与试剂 | 第68页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·仪器与试剂 | 第68页 |
| ·试剂盒、酶和Maker | 第68页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第68页 |
| ·实验用具与耗材 | 第68页 |
| ·引物合成与测序 | 第68页 |
| 2 试验方法 | 第68-71页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取及纯化 | 第68-69页 |
| ·金银花叶片总RNA的提取 | 第68页 |
| ·金银花叶片总RNA的纯化 | 第68页 |
| ·金银花叶片RNA含量及浓度测定 | 第68-69页 |
| ·3'RACE | 第69-70页 |
| ·3’RACE引物设计 | 第69页 |
| ·3’RACE Ready cDNA的合成 | 第69页 |
| ·3’末端的PCR扩增 | 第69-70页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第70页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第70页 |
| ·5'RACE | 第70-71页 |
| ·5’RACE引物设计 | 第70页 |
| ·5’RACE Ready cDNA的合成 | 第70页 |
| ·5’末端的PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第71页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第71页 |
| 3 结果和分析 | 第71-74页 |
| ·金银花叶片chi基因cDNA的RACE及序列分析 | 第71-73页 |
| ·金银花叶片chi基因cDNA的3'RACE | 第71-72页 |
| ·金银花叶片chi基因cDNA的5'RACE扩增 | 第72-73页 |
| ·金银花叶片chi基因cDNA全长的获得 | 第73-74页 |
| 4 生物信息学分析 | 第74-77页 |
| ·金银花叶片chi基因cDNA序列同源性分析 | 第74页 |
| ·金银花叶片CHI蛋白序列分析 | 第74-77页 |
| ·金银花叶片CHI氨基酸及亲水性分析 | 第74-76页 |
| ·金银花叶片CHI蛋白质跨膜区结构及二级结构的预测 | 第76-77页 |
| 5 讨论 | 第77-78页 |
| 第五章 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 附录A：攻读学位期间发表的论文 | 第88页 |
| 附录B：参与导师项目课题 | 第88页 |
| 附录C：基因登录号 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
