| 第一部分: zika病毒NS3具有依赖ATP水解的dsDNA解链活性 | 第5-44页 |
| 中文摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-9页 |
| 材料和方法 | 第9-21页 |
| 1. 实验材料 | 第9-12页 |
| 1.1 实验菌株 | 第9页 |
| 1.2 质粒载体 | 第9页 |
| 1.3 引物序列 | 第9-10页 |
| 1.4 实验试剂 | 第10-11页 |
| 1.5 实验仪器及耗材 | 第11-12页 |
| 2. 实验方法 | 第12-21页 |
| 2.1 zika NS3表达载体的构建 | 第12-14页 |
| 2.2 zika NS3的诱导表达 | 第14页 |
| 2.3 考马斯亮蓝染色 | 第14-15页 |
| 2.4 western blot | 第15-16页 |
| 2.5 zika NS3蛋白大规模诱导表达、纯化 | 第16-17页 |
| 2.6 ATPase活性检测 | 第17-18页 |
| 2.7 dsDNA解链活性检测 | 第18-19页 |
| 2.8 定点突变获得zika NS3 G198A表达载体 | 第19-20页 |
| 2.9 数据库网站和分析软件 | 第20-21页 |
| 研究结果 | 第21-36页 |
| 1. pET28a-zika NS3表达载体的构建 | 第21-24页 |
| 1.1 PCR扩增zika NS3片段 | 第21页 |
| 1.2 pET28a-zika NS3表达载体测序结果 | 第21-24页 |
| 2. zika NS3蛋白小规模诱导表达 | 第24-25页 |
| 3. zika NS3蛋白大规模表达纯化 | 第25页 |
| 4. zika NS3体外可以水解ATP | 第25-26页 |
| 5. zika NS3在体外可以解链dsDNA | 第26-29页 |
| 6. pET-28-zika NS3 G198A表达载体的构建 | 第29页 |
| 7. zika NS3 G198A蛋白的表达纯化 | 第29-31页 |
| 8. zika NS3 G198A与野生型NS3含量比较 | 第31-32页 |
| 9. NS3 G198A蛋白的ATP水解活性显著低于野生型NS3蛋白 | 第32-33页 |
| 10. zika NS3 G198A对dsDNA的解链活性低于野生型NS3蛋白 | 第33-36页 |
| 讨论 | 第36-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 综述一: 黄病毒NS3结构和功能研究现状 | 第38-44页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 第二部分: 探索zika病毒E蛋白的候选受体分子 | 第44-94页 |
| 中文摘要 | 第44-45页 |
| Abstract | 第45-47页 |
| 前言 | 第47-50页 |
| 材料和方法 | 第50-60页 |
| 1 实验材料 | 第50-53页 |
| 1.1 菌株和细胞株 | 第50页 |
| 1.2 质粒载体 | 第50-51页 |
| 1.3 引物序列 | 第51页 |
| 1.4 实验试剂 | 第51-52页 |
| 1.5 实验仪器 | 第52-53页 |
| 2 实验方法 | 第53-60页 |
| 2.1 真核表达载体的构建 | 第53页 |
| 2.2 细胞的复苏、培养以及冻存 | 第53-54页 |
| 2.3 细胞转染及真核蛋白表达 | 第54-55页 |
| 2.4 上清中蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 2.5 碱性磷酸酶(AP)系统建立 | 第56页 |
| 2.6 利用AP系统检测zika E蛋白是否与SNB-19和GC1细胞结合 | 第56-57页 |
| 2.7 辣根过氧化物酶(HRP)系统建立 | 第57-58页 |
| 2.8 质谱鉴定 | 第58页 |
| 2.9 利用HRP系统将将结合在细胞表面的E蛋白附近的蛋白生物素化 | 第58-59页 |
| 2.10 质谱鉴定E蛋白结合后生物素化的蛋白 | 第59-60页 |
| 实验结果 | 第60-84页 |
| 1. AP系统建立 | 第60页 |
| 2. HRP系统建立 | 第60-61页 |
| 3. 质谱鉴定进一步确定HRP系统的可靠性 | 第61页 |
| 4. zika ECD-AP实验结果 | 第61-62页 |
| 5. zika ECD HRP实验结果 | 第62页 |
| 6. 质谱鉴定SNB-19和GC1生物素化的蛋白 | 第62-84页 |
| 讨论 | 第84-85页 |
| 结论 | 第85-86页 |
| 综述二: 黄病毒受体研究现状 | 第86-94页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
