| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 蛋白质重组及融合标签技术 | 第11-12页 |
| 1.2 TEVp及其突变体研究 | 第12-13页 |
| 1.3 固定化蛋白酶的相关研究 | 第13-14页 |
| 1.4 融合蛋白亲和柱上酶切的相关研究 | 第14-15页 |
| 1.5 可视化检测系统的研究 | 第15-17页 |
| 2 引言 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-26页 |
| 3.1 材料 | 第18-19页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和基因 | 第18页 |
| 3.1.2 试剂 | 第18页 |
| 3.1.3 仪器和设备 | 第18-19页 |
| 3.1.4 部分试剂及缓冲液的配置 | 第19页 |
| 3.1.5 本研究中所需要的引物 | 第19页 |
| 3.2 方法 | 第19-26页 |
| 3.2.1 载体构建的相关反应体系 | 第19-20页 |
| 3.2.2 融合TEVp表达载体的构建 | 第20-21页 |
| 3.2.3 彩虹融合蛋白底物表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 3.2.4 不同融合蛋白的表达条件 | 第22页 |
| 3.2.5 RAC的活化 | 第22页 |
| 3.2.6 游离态和固定化TEVp的纯化 | 第22-23页 |
| 3.2.7 游离态和固定化TEVp的活性分析 | 第23-24页 |
| 3.2.8 固定化TEVp重复使用的活性分析 | 第24页 |
| 3.2.9 固定化TEVp的柱上酶切效率分析 | 第24页 |
| 3.2.10 可视化检测固定化TEVp柱上酶切彩虹融合蛋白的效率 | 第24-25页 |
| 3.2.11 标签与靶蛋白之间连接臂长度对柱上酶切的影响 | 第25-26页 |
| 4 结果与分析 | 第26-36页 |
| 4.1 载体构建 | 第26页 |
| 4.2 固定化和游离态TEVp的制备 | 第26-27页 |
| 4.3 游离态和固定化TEVp的活性及稳定性分析 | 第27-28页 |
| 4.4 固定化TEVp的吸附稳定性和重复使用活性分析 | 第28-29页 |
| 4.5 固定化TEVp的柱上酶切效率分析 | 第29-30页 |
| 4.6 固定化TEVp柱上酶切效率的可视化检测 | 第30-33页 |
| 4.7 标签与靶蛋白之间连接臂长度对柱上酶切效率的影响 | 第33-36页 |
| 5 讨论 | 第36-39页 |
| 5.1 固定化TEVp的活性及稳定性研究 | 第36页 |
| 5.2 固定化TEVp用于融合蛋白柱上酶切研究 | 第36-37页 |
| 5.3 可视化柱上酶切检测系统研究 | 第37页 |
| 5.4 标签与靶蛋白之间连接臂长度对柱上酶切效率影响研究 | 第37-39页 |
| 6 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-49页 |
| 个人简介 | 第49页 |
