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肿瘤相关成纤维细胞引起化疗耐药及天然化合物治疗食管鳞癌的作用机制研究

第一部分 顺铂激活肿瘤相关成纤维细胞通过旁分泌PAI-1促进食管鳞癌增殖和引起化疗耐药 Part 1 Cisplatin-activated PAI-1 secretion from cancer-associated fibroblasts promotesesophageal squamous cell carcinoma grwoth and causes chemoresistance via paracrineeffects第11-71页
    中英文缩略词第12-13页
    摘要第13-15页
    Abstract第15-17页
    前言第17-22页
        一、食管癌流行病学现状及治疗进展第17页
        二、肿瘤微环境在食管癌中发挥的作用第17-19页
        三、纤溶酶原激活物抑制剂-1 (PAI-1)在食管鳞癌中的作用第19-20页
        四、活性氧簇(ROS)在食管鳞癌中的作用第20-22页
    实验材料第22-26页
        一、实验试剂第22-24页
        二、主要仪器设备第24-25页
        三、溶液配制第25-26页
    实验方法第26-48页
        一、细胞培养第26-28页
            1、细胞培养第26页
            2、原代培养CAF细胞第26-27页
            3、细胞复苏第27页
            4、细胞培养和传代第27-28页
            5、细胞的冻存第28页
        二、CAF的免疫荧光鉴定第28-29页
        三、CAF条件培养基的制备第29页
        四、蛋白芯片第29-31页
            1、实验材料及试剂第29-30页
            2、实验步骤第30页
            3、实验注意事项第30-31页
        五、ELISA第31-32页
            1、实验原理第31页
            2、实验步骤第31-32页
        六、细胞共培养第32-34页
            1、CAF条件培养基与食管鳞癌细胞共培养第32-33页
            2、建立Tranwell小室共培养体系(食管鳞癌细胞与CAF)第33-34页
        七、PAI-1对食管鳞癌细胞克隆形成的影响第34页
            1、实验原理第34页
            2、实验步骤第34页
        八、细胞凋亡检测第34-35页
            1、实验原理第35页
            2、实验步骤第35页
        九、质粒构建和转染第35-38页
            1、构建PAI-1过表达质粒第35-36页
            2、质粒的小量提取第36-37页
            3、质粒的中量提取第37-38页
        十、慢病毒的包装第38-39页
            1、慢病毒的包装第38-39页
            2、慢病毒感染目的细胞系第39页
        十一、细胞内ROS水平第39-40页
            1、实验原理第39页
            2、实验步骤第39-40页
        十二、Western blot检测蛋白表达水平第40-44页
            1、提取总蛋白第40页
            2、测定蛋白浓度第40-42页
            3、Western blot蛋白印迹检测蛋白表达水平第42-44页
        十三、体内裸鼠实验第44-46页
            1、裸鼠皮下成瘤实验第44-45页
            2、移植瘤组织蜡块的制备第45-46页
            3、组织切片第46页
            4、石蜡切片的Hematoxylin-Eosin (HE)染色第46页
        十四、统计方法第46-48页
    实验结果第48-59页
        一、食管鳞癌CAF的分离、培养和鉴定第48页
        二、顺铂预处理的CAF可以在体外促进食管鳞癌细胞的增殖和引起化疗耐药第48-50页
            1、使用CAF的条件培养基与食管鳞癌细胞共培养第48-49页
            2、使用Transwell共培养体系第49-50页
        三、PAI-1是顺铂处理CAF后分泌的关键细胞因子第50-51页
            1、蛋白芯片筛选顺铂处理CAF与未处理CAF分泌的差异细胞因子第50页
            2、ELISA验证蛋白芯片结果第50-51页
            3、顺铂处理CAF引起的改变第51页
        四、旁分泌的PAI-1促进食管鳞癌细胞增殖和克隆形成,同时抑制顺铂引起的食管鳞癌细胞凋亡第51-53页
            1、PAI-1促进食管鳞癌细胞克隆形成第51-52页
            2、PAI-1促进食管鳞癌细胞增殖第52页
            3、PAI-1抑制顺铂引起的食管鳞癌细胞凋亡第52-53页
        五、PAI-1抑制顺铂引起的食管鳞癌细胞ROS升高第53-55页
            1、顺铂引起食管鳞癌细胞ROS升高第53-54页
            2、PAI-1可以抑制顺铂引起的食管鳞癌细胞ROS升高第54-55页
        六、PAI-1可以抑制Caspase-3和γH2AX,激活AKT和ERK1/2第55-57页
            1、PAI-1可以抑制Caspase-3和γH2AX第55页
            2、PAI-1可以激活ERK1/2和AKT第55-56页
            3、PAI-1抑制剂Tiplaxtinin可以抑制AKT和ERK1/2的磷酸化水平第56-57页
        七、PAI-1在裸鼠体内促进食管鳞癌生长并减弱顺铂对食管鳞癌的抑瘤作用第57-59页
            1、PAI-1可以促进食管鳞癌细胞KYSE30在裸鼠皮下成瘤第57页
            2、PAI-1可以在裸鼠体内减弱顺铂的抑瘤作用第57-58页
            3、PAI-1抑制剂Tiplaxtinin可以协同顺铂发挥抗肿瘤作用第58-59页
    讨论第59-64页
    小结第64-65页
    参考文献第65-71页
第二部分 长管香茶菜甲素通过增加ROS和激活JNK/p38 MAPK诱导食管鳞癌细胞凋亡 Part 2 The therapeutic effects of Longikaurin A, a natural ent-kauranoid, in esophageal squamouscell carcinoma depend on ROS accumulation and JNK/p38 MAPK activation第71-114页
    中英文缩略词表第72-73页
    摘要第73-75页
    Abstract第75-77页
    前言第77-79页
    实验材料第79-82页
        一、实验试剂第79-81页
        二、主要仪器设备第81-82页
    实验方法第82-94页
        一、长管香茶菜甲素的制备与结构鉴定第82页
            1、LK-A的制备第82页
            2、LK-A的结构鉴定第82页
        二、细胞培养第82-84页
            1、实验使用的细胞系第82-83页
            2、细胞复苏第83页
            3、细胞培养和传代第83-84页
            4、细胞冻存第84页
        三、LK-A对食管鳞癌细胞增殖的影响第84-85页
        四、LK-A对食管鳞癌细胞克隆形成的影响第85页
        五、LK-A对食管鳞癌细胞周期的影响第85-86页
        六、LK-A对食管鳞癌细胞凋亡的影响第86-88页
        七、LK-A对食管鳞癌细胞ROS的影响第88页
        八、Western blot检测蛋白的表达水平第88-90页
            1、提取总蛋白第88-89页
            2、Western blot蛋白印迹检测蛋白表达水平第89-90页
        九、裸鼠实验第90-93页
            1、裸鼠皮下成瘤实验第90-91页
            2、移植瘤、肝、肾组织石蜡包埋第91-92页
            3、组织切片第92页
            4、石蜡切片的Hematoxylin-Eosin(HE)染色第92-93页
        十、统计方法第93-94页
    实验结果第94-108页
        一、长管香茶菜甲素的结构鉴定和纯化分析第94-97页
        二、LK-A选择性抑制食管鳞癌细胞的增殖和克隆形成第97-98页
            1、LK-A抑制食管鳞癌细胞增殖第97页
            2、LK-A抑制食管鳞癌细胞克隆形成第97-98页
        三、LK-A引起食管鳞癌细胞G2/M期阻滞第98-99页
            1、LK-A引起食管鳞癌细胞G2/M期阻滞第98-99页
            2、Western blot结果显示LK-A可以降低细胞周期相关蛋白表达水平第99页
        四、LK-A诱导食管鳞癌细胞凋亡第99-102页
            1、LK-A可以诱导食管鳞癌细胞凋亡,并呈时间、剂量依赖性第99-101页
            2、LK-A通过Caspase依赖的线粒体凋亡途径诱导食管鳞癌细胞凋亡第101页
            3、Caspase抑制剂Z-VAD(OMe)-FMK可以部分逆转LK-A引起的食管鳞癌细胞凋亡第101-102页
        五、ROS在LK-A诱导的食管鳞癌细胞凋亡中的作用第102-103页
            1、LK-A可以引起食管鳞癌细胞内ROS增加第102-103页
            2、NAC可以逆转LK-A引起的食管鳞癌细胞凋亡第103页
        六、LK-A激活MAPK通路第103-105页
            1、LK-A可以激活JNK和p38通路而不是Erk1/2通路。第103-104页
            2、JNK和p38通路抑制剂可以抑制LK-A诱导的细胞凋亡第104-105页
            3、NAC可以减弱JNK和p38磷酸化水平第105页
        七、LK-A抑制裸鼠移植瘤的生长,并具有一定的安全性第105-108页
            1、LK-A抑制裸鼠移植瘤的生长第106页
            2、评估LK-A体内的安全性第106-108页
    讨论第108-111页
    小结第111-112页
    参考文献第112-114页
基金资助第114-115页
在学期间发表论文第115-116页
文献综述第116-122页
    参考文献第119-122页
致谢第122-123页
个人简历第123-124页

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