| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 萜类化合物合成途径的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.1 萜类化合物研究 | 第10页 |
| 1.1.2 萜类化合物合成途径的研究 | 第10-11页 |
| 1.2 萜类化合物合成途径中关键酶基因的研究进展 | 第11-16页 |
| 1.2.1 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR) | 第12页 |
| 1.2.2 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(DXS) | 第12-13页 |
| 1.2.3 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR) | 第13页 |
| 1.2.4 异戊烯基转移酶 | 第13-14页 |
| 1.2.5 萜类合酶(TPS) | 第14-16页 |
| 1.3 植物遗传转化体系的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.1 遗传转化的技术方法的研究 | 第16-17页 |
| 1.3.2 菊花遗传转化体系的研究 | 第17页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第17-19页 |
| 2 神农香菊TPS基因克隆及生物信息学分析 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.2.1 神农香菊总RNA的提取与检测 | 第19页 |
| 2.2.2 神农香菊总RNA反转录成cDNA | 第19页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.2.4 TPS基因PCR扩增 | 第20页 |
| 2.2.5 T载体连接及测序 | 第20-21页 |
| 2.2.6 基因序列的生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-27页 |
| 2.3.1 总RNA电泳及浓度检测 | 第21-22页 |
| 2.3.2 TPS基因克隆与序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3.3 CiTPS基因结构域分析 | 第23页 |
| 2.3.4 CiTPS基因的理化性质分析 | 第23-24页 |
| 2.3.5 CiTPS氨基酸序列比对 | 第24-25页 |
| 2.3.6 CiTPS基因的系统进化树分析 | 第25-26页 |
| 2.3.7 CiTPS基因的蛋白质分析 | 第26-27页 |
| 2.4 小结 | 第27-29页 |
| 3 CiTPS基因植物表达载体的构建及转化烟草 | 第29-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 3.2.1 中间表达载体的构建 | 第29页 |
| 3.2.2 植物表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.2.3 农杆菌感受态的制备 | 第30-31页 |
| 3.2.4 植物表达载体及空载体转化农杆菌 | 第31页 |
| 3.2.5 烟草叶盘法转化及再生 | 第31-32页 |
| 3.2.6 转CiTPS基因烟草鉴定 | 第32页 |
| 3.2.7 转CiTPS基因烟草不同株系的qRT-PCR检测 | 第32-33页 |
| 3.2.8 不同株系烟草的播种 | 第33页 |
| 3.2.9 转CiTPS基因烟草不同株系的叶片分泌物质检测 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-39页 |
| 3.3.1 中间表达载体构建 | 第33-34页 |
| 3.3.2 植物表达载体构建 | 第34-35页 |
| 3.3.3 农杆菌菌液PCR | 第35页 |
| 3.3.4 烟草叶盘法转化及再生 | 第35-36页 |
| 3.3.5 转基因烟草株系检测 | 第36-37页 |
| 3.3.6 不同转基因烟草株系qRT-PCR | 第37-38页 |
| 3.3.7 转基因烟草叶片分泌物检测 | 第38-39页 |
| 3.4 小结 | 第39-40页 |
| 4 野菊遗传转化体系的优化及转化野菊 | 第40-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 野菊无菌苗培养 | 第40页 |
| 4.2.2 野菊叶片分化体系优化 | 第40-41页 |
| 4.2.3 农杆菌介导法转化条件优化 | 第41页 |
| 4.2.4 野菊叶盘法转化及再生 | 第41-42页 |
| 4.2.5 转CiTPS基因野菊鉴定 | 第42-43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-48页 |
| 4.3.1 野菊叶片分化培养基的确定 | 第43页 |
| 4.3.2 叶盘分化培养基中卡那霉素(Kana)浓度的筛选 | 第43-44页 |
| 4.3.3 卡那霉素(Kana)对不定芽生根的影响 | 第44页 |
| 4.3.4 头孢霉素(Cef)抑菌浓度的筛选 | 第44-45页 |
| 4.3.5 预培养时间的确定 | 第45页 |
| 4.3.6 农杆菌侵染时间的确定 | 第45-46页 |
| 4.3.7 共培养时间的确定 | 第46页 |
| 4.3.8 野菊叶盘法转化及再生 | 第46页 |
| 4.3.9 转基因野菊株系检测 | 第46-48页 |
| 4.4 小结 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
